ir- rwol ta'm- mlv reverse transcriptase fis- sinteżi ta'cdna

m-mlv transkriptażi inversahija enżima popolari fil-bijoloġija molekulari li katalisa t-traskrizzjoni ta' RNA għal DNA komplementari (cdna) u hija eżerċitata mill-virus tal-lewkimja murina ta' Moloney. hija enżima essenzjali għall-klonazzjoni u s-sekwenzjar tal-ġeni u wkoll biex

applikazzjonijiet fil-bijoloġija molekulari

wieħed mill-aktar użi komuni ta' m-mlv reverse transcriptase huwa fil-qasam ta' studji dwar l-espressjoni tal-ġeni. Dan spiss isir bit-traskrizzjoni inversa ta' mrna li hija mRNA konvertibbli għal cdna li tippermetti l-istima tal-livelli ta' espressjoni tal-ġeni permezz ta

vantaġġi u limitazzjonijiet

Il-m-mlv reverse transcriptase għandha xi benefiċċji, fosthom il-kapaċità li tippermetti proċesstività u fedeltà għolja, li huma mixtieqa fis-sintesi ta' molekuli CDNA twal. xorta, hemm xi żvantaġġi ma' din l-enżima, inkluż il-grad ta' xi strutturi eżistenti fil-mud

Tekniki u protokolli

Biex tuża b'mod effettiv l-M-MLV Reverse Transcriptase, għandu jsir attenzjoni speċjali għall-fatturi bħall-għażla ta' primers, it-temperatura tal-reazzjoni u l-kompożizzjoni tal-buffer fost oħrajn. Il-primers għandhom ikunu konstruwiti b'tali mod li ma jkunx hemm loops ta' hairpin u li l-bonding mal-template tal-RNA jkun massimizzat. Meqjusa bħala ottimali għal reazzjoni ta' enzimi, 42°C hija temperatura li hija komuni għal dawn ir-reazzjonijiet sabiex l-attività u l-istabbiltà tal-enzimi jkunu ottimali. Min-naħa l-oħra, l-użu ta' sustanzi oħra bħalInibituri ta'rnasejista' wkoll iżomm l-RNA li jista' jiġi degradat matul ir-reazzjoni.

perspettivi futuri

Il-promozzjoni tal-bijoteknoloġija se tgħinna wkoll nagħmlu progress ulterjuri fl-użu tat-transkriptażi inversa m-mlv. Strateġiji ġodda disponibbli llum jinkludu l-kostruzzjoni ta' enżimi modifikati minn inġiniera bil-proprjetajiet mixtieqa li ġew manifatturati.

biex niġbor fil-qosor, m-mlv reverse transcriptase tikkostitwixxi karatteristika essenzjali fl-investigazzjoni tal-bijoloġija molekulari minħabba l-importanza li għandha għall-introduzzjoni tas-CDNA fiċ-ċelloli. għalkemm qed jiġu kontinwament imqabbda sfidi, hemm enfasi fuq l-iżvilupp ta