Inibitur tar- ribonuclease, inibitur ta'rnase

Inibitur rikombinanti tal-plaċenta umana ribonuclease, 40 u/μl

sors

razez ta' e. coli li jesprimu klon rikombinanti li jġorr ġene ta' inibitur tar-ribonuclease mill-plaċenta umana.

konċentrazzjoni

40 u/μl.

definizzjoni ta' unità

unità waħda hija definita bħala l-ammont ta' inibitur rikombinanti tar-ribonuclease meħtieġ biex inibixxi l-attività ta' 5ng ta' ribonuclease a b'50%.

L- attività hija mkejla bl- inibizzjoni tal- idroliżi tas- cytidine 23- cyclic monophosphate minn ribonuclease a.

buffer tal-ħażna

20 mm hepes-koh ((ph7.6), 50 mm kcl, 8 mm dtt, 50% ((v/v) gliserol

ħażna

maħżun f' -20°c

kontroll tal-kwalità

nuqqas ta'endonuclease
1 μg ta' lambda dna jiġi inkubat b' 200 unità ta' inibitur tar- ribonuclease għal 16- il siegħa f' 37°c.
wara l-inkubazzjoni, id-DNA tal-lambda jiġi viżwalizza bħala intatt fuq ġel ta' agarose mdawwar bil-bromur tal-etjidu biex jiġi vverifikat l-assenza ta' endonukleasi viżibbli.

assenza ta' nikasa
1 μg ta' pbr322 tip i superkollat jiġi inkubat b'200 unità ta' inibitur tar-ribonuclease għal 4 sigħat f'temperatura ta' 37°c.
wara l-inkubazzjoni, id-DNA super-coiled jiġi viżwalizza fuq ġel ta' agarose mdawwar bil-bromur tal-etjidu biex jiġi vverifikat l-assenza ta' xquq jew qtugħ viżibbli.

nuqqas ta'exonuclease
1 μg ta' markers tal-DNA lambda/hindiii jiġu inkubati b'200 unità ta' inibitur tar-ribonuclease għal 16-il siegħa f'temperatura ta' 37°c.
wara l-inkubazzjoni, il-markaturi tal-DNA tal-lambda/indiii jiġu separati minn ġel ta' 1% agarose u mdawra bil-bromur tal-etjidu. Il-markaturi jibqgħu bħala strixxi intatti mingħajr ma jitnaddfu.

assenza ta'rnase u rnase latenti
biex jiġi ttestjat il-preżenza ta' attività ta' rnase, 1 ug ta' rna tiġi inkubata b'200 unità ta' inibitur ta' ribonuclease għal 4 sigħat f'temperatura ta' 37°c.
Wara l-inkubazzjoni, l-RNA jiġi viżwalizza bħala band intatt fuq ġel ta' agarose mdawwar bil-bromur tal-etidju biex jiġi vverifikat l-assenza ta' rnase viżibbli.
Biex jiġi ttestjat il-preżenza ta' attività latenti ta' rnase, 200 unità ta' inibitur tar-ribonuclease jiġu denaturati bis-sħana f'temperatura ta' 70°c għal 15-il minuta u inkubati b'1 ug ta' rna għal 4 sigħat f'temperatura ta' 37°c
Wara l-inkubazzjoni, l-RNA jiġi viżwalizza bħala band intatt fuq ġel ta' agarose mdawwar bil-bromur tal-etidju biex jiġi vverifikat l-assenza ta' rnase viżibbli.

purità fiżika

il-purità hija ≥95% kif ġudikat bil-ġel ta' sds-polyacrylamide b'kulur blu ta' coomassie.

nota ta' użu

L- inibitur tar- ribonuclease huwa attiv fuq firxa wiesgħa ta'pH (ph5. 5-9). it- traskrizzjoni standard rt u in vitro tuża inibitur tar- ribonuclease f' konċentrazzjoni finali ta'1 u/ ul.

ordni