Penghalang ribonukleasa, penghalang rnase 40u ul

Penghalang ribonukleasa plasenta manusia yang dikombinasikan semula, 40u/μl

sumber

Strain e. coli yang menyatakan klon rekombinan yang membawa gen penghambat ribonukleasa dari plasenta manusia.

kepekatan

40 u/μl.

definisi unit

satu unit ditakrifkan sebagai jumlah inhibitor ribonukleasa rekombinan yang diperlukan untuk menghalang aktiviti 5ng ribonukleasa a sebanyak 50%.

Aktiviti dikesan dengan penghambatan hidrolisis cytidine 23-cyclic monophosphate oleh ribonuclease a.

penyangga simpanan

20mm hepes-koh ((ph7.6), 50mm kcl, 8mm dtt, 50% ((v/v) gliserol

penyimpanan

Simpan pada suhu -20°c

kawalan kualiti

tiada endonukleasa
1μg lambda DNA dikukus dengan 200 unit penghambat ribonukleasa selama 16 jam pada 37 °C.
Selepas inkubasi, lambda DNA dilihat utuh pada gel agarose yang diwarnai dengan ethidium bromide untuk mengesahkan ketiadaan endonukleasa yang kelihatan.

Tiada nikase
1μg pbr322 supercoiled jenis i dikukus dengan 200 unit penghambat ribonukleasa selama 4 jam pada 37 °C.
Selepas inkubasi, DNA supercoiled dilihat pada gel agarose yang diwarnai dengan ethidium bromide untuk mengesahkan ketiadaan pencucian atau pemotongan yang kelihatan.

ketiadaan exonuclease
1μg penanda lambda dna/hindiii dikukus dengan 200 unit penghambat ribonukleasa selama 16 jam pada 37°c.
Selepas inkubasi, penanda lambda DNA/hindiii dipisahkan dengan gel agarose 1% dan diwarnai dengan ethidium bromide. Penanda kekal sebagai jalur utuh tanpa mencuci.

Tiada rnase dan rnase laten
Untuk menguji kehadiran aktiviti rnase, 1 ug rna dikukus dengan 200 unit penghambat ribonukleasa selama 4 jam pada 37 °C.
Selepas inkubasi, RNA divisualkan sebagai jalur utuh pada gel agarose yang diwarnai dengan ethidium bromide untuk mengesahkan ketiadaan rnase yang kelihatan.
Untuk menguji kehadiran aktiviti rnase laten, 200 unit penghalang ribonukleasa dipenuhkan dengan haba pada 70°C selama 15 minit dan diinkubasi dengan 1ug rna selama 4 jam pada 37°C.
Selepas inkubasi, RNA divisualkan sebagai jalur utuh pada gel agarose yang diwarnai dengan ethidium bromide untuk mengesahkan ketiadaan rnase yang kelihatan.

kemurnian fizikal

kemurnian ≥95% yang dinilai oleh gel sds-polyacrylamide dengan pewarnaan biru coomassie.

Nota penggunaan

Penghambat ribonukleasa aktif dalam julat pH yang luas (ph5. 5-9). rt standard dan transkripsi in vitro menggunakan penghambat ribonukleasa pada kepekatan akhir 1 u / ul.

Perintah