Poly a polimerase dalam persediaan penjijian generasi seterusnya (ngs)

poli a polimerase(PAP) adalah tindakan enzimatik utama yang bertanggungjawab untuk menambah ekor poly-A ke hujung 3’ molekul RNA. Aktiviti ini mempunyai peranan yang signifikan dalam kestabilan keseluruhan, pengangkutan, dan terjemahan RNA. Dalam rangka kerja NGS, bagaimanapun, PAP membolehkan penambahan oligo A kepada sampel RNA sebelum penjujukan supaya data berkualiti tinggi dari pelbagai sumber RNA dapat diperoleh.

Kepentingan Menambah Ekor Poly A

Terdapat banyak kelebihan yang berkaitan dengan penggabungan ekor poly A kepada mRNA. Pertama sekali, ekor A membantu dalam meningkatkan kestabilan molekul RNA terhadap aktiviti ribonuklease oleh exonucleases. Kedua, ekor poly A mempunyai peranan dalam permulaan terjemahan melalui promosi pengikatan ribosom kepada mRNA. Dalam kes persediaan NGS, mRNA bertail poly A boleh dengan mudah digunakan untuk analisis ekspresi gen yang lebih fokus bersama dengan variasi transkrip kerana ia boleh diperkaya secara khusus.

Persediaan Sampel NGS

Alur kerja NGS termasuk penyediaan sampel RNA yang melibatkan langkah-langkah berikut: transkripsi terbalik, pembinaan CDNA, dan penguatan. Ia juga biasa untuk menambah Polimerase Poly A semasa sintesis CDNA untuk memasukkan ekor poly-A dalam molekul cDNA akhir. Pengubahsuaian ini adalah kritikal untuk penguatan dan penjujukan perpustakaan kerana ia meningkatkan kecekapan langkah-langkah yang terlibat dalam penyediaan perpustakaan.

Aplikasi dalam RNA-Seq

PAP juga sangat berguna dalam aplikasi penjujukan RNA (RNA-Seq) kerana ia membolehkan pengayaan yang lebih efisien untuk mRNA bertanda poly A. Ini membantu dalam menangkap gambaran tahap transkrip yang lebih jelas tentang organisma yang sedang dikaji. Oleh itu, peningkatan sedemikian dapat membantu dalam menentukan gen yang diekspresikan secara berbeza, peristiwa splicing alternatif, atau bahkan RNA bukan pengkode. Selain itu, termasuk PAP dalam penyediaan NGS membolehkan data yang lebih menjanjikan diperoleh.

Menambah PAP dalam persiapan NGS boleh meningkatkan kualiti dan ketepatan data penjujukan dengan ketara. Apa yang lebih penting, apabila penyelidikan terus berkembang, kepentingan PAP untuk membolehkan saintis menyiasat transkriptom akan kekal besar.