M-Mlv урд төгсөлт эмчийн cdna үүсгэхдээ ашигладаг

m-mlv эргэн шилжүүлэн бичмэл молекуляр биологийн түүхэнд ихээр хамгийн томъёолсон фермент юм. Энэ нь RNA-г комплементар cDNA-руу хөрвүүлэх үйл ажиллагааг хангахад зориулагддаг, мөн Moloney Murine Leukemia Virus-аас гаралтай. Энэ нь генүүдийг клонлох, дарааллахад үндэслэлийн фермент бөгөөд ген экспресийн судалгаанд ч ашигладаг. Энэ фермент ямар үйл ажиллагаатай, яаж ашигладаг вэ гэдгийг мэдэх нь биотехнологийн санаачилга болон практик уран баримтлалын ойролцоо шинэчлэлийг илэрхийлдэг.

Молекуляр биологийн ашиглалтууд

M-MLV Эрсдэл Транскриптазын хамгийн их ашиглалтын нэг нь ген ур чадварын судалгаан дээр байдаг. Энэ нь мөн mRNA-гийн эрсдэл транскрипц хийх зориулалтаар ашиглагддаг, энд тухайн mRNA нь cDNA руу шилжүүлэгдэнэ, эдгээр нь ген ур чадварын түвшинийг тооцоолоход PCR (qPCR) ашиглах боломжийг олгодог. Мөн энэ эрсдэл нь тодорхой генүүдийн cDNA хуулбаруудыг плазмид векторууд дахь багтаж үржүүлэх аргаар клонлохад шаардлагатай. Энэ нь cDNA сангийн үйлдвэрлэлийн тулд ч ашигладаг, энд cDNA молекулуудыг геномын илэрхийлсэн дарааллыг илэрхийлэх систем байдаг.

Эрхэм байдал ба хязгаарлал

M-MLV Эрсдэл тэмдэгт нь хамгийн их үзэгдлийн дараа их чадвар, зөвхөн багтаах боломжийг олгодог. Энэ нь урт cDNA молекулуудыг синтезлэхэд хэрэглэгчид хүссэн байдлыг биелүүлдэг. Тиймээс энэ эрсдэл тэмдэгтийн RNA шаблонд байгаа зургийн хэлбэрүүд нь энэ эрсдэл тэмдэгтийг ашиглахдаа хамгийн их үзэгдлийг өөрчилдөг. Эдгээр үзэгдлийн дараа cDNA-ийн синтезийг хэрэглэх боломжийг, ямар ч үндсэн хувьд үр дүнтэй болгох боломжийг бууруулдаг. Харин илтгэлийн нөхцөлүүдийг шинэчлэх шаардлагатай.

Техник, Протокол

M-MLV Уртасгагч Транскриптазийг үр дүнтэй ашиглахын тулд, праймеруудын сонголт, урвалын температур болон буферийн найрлага зэрэг хүчин зүйлсэд онцгой анхаарал хандуулах хэрэгтэй. Праймеруудыг үүсгэхдээ үсрэлттэй гогцоо байхгүй, мөн RNA загвартай холбогдох нь хамгийн их байхаар зохион байгуулах ёстой. Энзимийн урвалд хамгийн тохиромжтой гэж үздэг 42°C температур нь ийм урвалд нийтлэг байдаг тул энзимийн үйл ажиллагаа болон тогтвортой байдал хамгийн сайн байна. Үүний эсрэг, RNase татгалзлагч бусад бодисуудыг ашиглах нь урвалын явцад муудах RNA-г хадгалахад тусалж магадгүй.

Эцсийн үзэл

Биотехнологийн хөгжлийг дэлгэрэнгүй боловсруулж, M-MLV Reverze Транскриптаасын ашиглахад дахин зориулж үзүүлэх боломжтой. Одоогийн шинэ стратегууд нь инженерчлэгдсэнzymes-ийн хамгийн үргэлжлэх үр чадваруудтай холбоотой. Мөн энэ технологи нь оны дараа нийтлэг секвенингтэй холбогдсон gene expression, function-ийн судалгааг тодорхойлоход туслах боломжтой.

Дундаж хэлбэл, M-MLV Reverze Транскриптаас нь молекулын биологийн судалгаанд анхны үндсэн зорилготой байдаг. cDNA-г клеткд руу оруулахад их санаатай. Харин үргэлжлэх загваруудыг шинэчлэх, M-MLV reverze транскриптаасын үнэ цэнэтэй тодорхойлолтуудыг нэмэгдүүлэх боломжтой.