Рибонуклеазын төгсгөлийн эмчлэг, RNase төгсгөл 40Е μл

рекомбинант ангины эмчийн цогцлын Рибонуклеазын төвсгөлтөй, 40U/μl

Эх сурвалж

Э. coli эмзэг бактери нь хүний цөцгөөрөөс гаралтай Ribonuclease Inhibitor ген дээр тулгуурлагдсан рекомбинант клоныг илүүлдэг.

Хүнд төвлөрөл

40 U\/μl.

Нэгжийн тодорхойлолт

Нэг нэгж нь ribonuclease A-ийн 5 нанограммийн үйлчилгээг 50%-аар төхөөрөмжлөх шаардлагатай Recombinant Ribonuclease Inhibitor-ийн хэмжээнд тодорхойлогдсон.

Үйлчилгээ нь cytidine 2’3’-циклич монофосфатыг ribonuclease A-ар хидролизлөх үйлчилгээг төхөөрөмжлөхөөр тооцоолно.

Хадгалалтын буфер

20мM HEPES-KOH(PH7.6), 50мM KCl, 8мM DTT, 50%(v\/v) глицерол

Хадгалалт

-20°C-д хадгалах

Чанарын хяналт

Эндонуклеаз байхгүй
1μg Ламбда ДНХ нь 200 орнуудын Рибонуклеазын үргэлжлэгчтэй 16 цагийн туршлага 37°C-д явуулагдсан.
Туршлагын дараа, эндоген Нуклеазын байхгүйг шалгахын тулд Ламбда ДНХ нь этидийн бромидтой агароз гел дээр зөвхөн бүтэн болоод харгалзана.

Никкейсын байхгүй
1μg I төрлийн суперcoil pBR322 нь 200 орнуудын Рибонуклеазын үргэлжлэгчтэй 4 цагийн туршлага 37°C-д явуулагдсан.
Туршлагын дараа, суперcoil ДНХ нь этидийн бромидтой агароз гел дээр зөвхөн бүтэн болоод харгалзана. Никин эсвэл хуурах үзэгдэл байхгүй.

Эксонуклеазын байхгүй
1μg Ламбда ДНХ/ХиндIII маркер нь 200 орнуудын Рибонуклеазын үргэлжлэгчтэй 16 цагийн туршлага 37°C-д явуулагдсан.
Туршлагын дараа, Ламбда ДНХ/ХиндIII маркер нь 1% агароз гелээр хувааж, этидийн бромидтой өшгөнө. Маркерүүд нь бүтэн бандуудад байдаг, устасан үзэгдэлгүй.

РНase ба латент РНase-ын байхгүй
РНase үйлчилгээний байгаа эсэхийг шалгахын тулд 1уг РНК нь 200 орнуудын Рибонуклеазын үргэлжлэгчтэй 4 цагийн туршлага 37°C-д явуулагдсан.
Зэрэглэсний дараа, RNA нь этидийн бромидтой хамгаалсан агароз гель дээр тогтмол бүлэг гэж үзэгдэнэ, энд RNase-ийн харагдахgui байдал байгааг шалгахын тулд.
Хуучин RNase зэрэглэлийн байрлалыг шалгахын тулд, Ribonuclease Inhibitor-ийн 200 units нь 70°C температурт 15 минут байдлаар уламжлалтай болгоод, 1уг RNA-тай 37°C температурт 4 цагийн туршдаа зэрэглэсэн.
Зэрэглэсний дараа, RNA нь этидийн бромидтой хамгаалсан агароз гель дээр тогтмол бүлэг гэж үзэгдэнэ, энд RNase-ийн харагдахgui байдал байгааг шалгахын тулд.

Физик чимэг

SDS-полиакриламид гель Coomassie blue-ийн хөрвүүлэлтээр 95%-аас илүү чимэгтэй байдаг.

Ашиглахад

Ribonuclease Inhibitor нь их pH хэмжээнд (pH5.5-9) ажилладаг. RT стандарт, in vitro transcription-д Ribonuclease Inhibitor нь 1u/ul-ийн концентрацид ашигладаг.

захиалга