Рибонуклеазын ингибитор, рназын ингибитор

Хүний плацентын рибонуклеазын рекомбинантын ингибитор, 40у/μl

эх сурвалж

Хүний биедээс рибонуклеазын ингибитор генийг авч байгаа рекомбинантын клоныг илэрхийлдэг e. coli штамм

төвлөрөл

40 у/мл.

нэгжийн тодорхойлолт

нэгж нь 5ng-ийн рибонуклеаз а-ийн үйл ажиллагааг 50%-иар сааруулах шаардлагатай рекомбинантын рибонуклеазын ингибиторын хэмжээ гэж тодорхойлдог.

Асуудал нь цитидин 23- циклик монофосфатын рибонуклеаз а-ийн гидролизэд нөлөөлөхөөр хэмжигддэг.

хадгалах буфер

20mm hepes-koh ((ph7.6), 50mm kcl, 8mm dtt, 50% ((v/v) глицерол

хадгалах

-20°C-д хадгалах

чанарын хяналт

Энденуклеаз байхгүй
1μg ламбда ДНК-г 200 нэгж рибонуклеазын ингибитортой 37°C-д 16 цаг инкубацдаг.
Ургацлахын дараа ламбда ДНК-г этидийн бромдтой бодитой агарозын гелд хамаарахгүйгээр үзэгдэх эндонуклеаз байхгүй эсэхийг шалгахын тулд үзэгддэг.

Никаз байхгүй
1μg I төрлийн supercoiled pbr322 нь 200 нэгж рибонуклеазын ингибитоор 37°C-д 4 цаг инкубацдаг.
Ургацлахын дараа этидийн бромдтой бодитой агарозын гелд хэтэрсэн ДНК-г үзэгдэх ялгаралт эсвэл хагалгагүй байдлыг шалгахын тулд үзэгдэх боломжтой.

экзонуклеаз байхгүй
1μg lambda dna/hindiii маркерийг 200 нэгж рибонуклеазын ингибитортой 37°C-д 16 цаг инкубацдаг.
Ургацлахын дараа ламбда ДНК/индиии маркерийг 1% агароз гельээр ялгаж, этидийн бромдидээр бодоод, маркер нь халдваргүй, бүтэн бүлэг хэвээр үлддэг.

rnase-ийн дутагдал, rnase-ийн нуугдмал дутагдал
rnase-ийн идэвхжилт илэрсэн эсэхийг шалгахын тулд 1 уг rna-г 200 нэгж рибонуклеазын ингибитортой 37°C-д 4 цаг инкубацдаг.
Ургацлалтын дараа РНХ-г этидийн бромдтой бодитой агароз гелийн дээр хатуу бүлэг хэлбэрээр үзэгдэж, харагдах рназ байхгүй эсэхийг шалгах.
рназ идэвхжилт илрэхгүй эсэхийг шалгахын тулд 200 нэгж рибонуклеазын ингибиторыг 70°C-д 15 минутын турш халуун цэврийн дулаантайгаар дэнатурилж, 37°C-д 1 уг рна-тай 4 цаг инкубацдаг.
Ургацлалтын дараа РНХ-г этидийн бромдтой бодитой агароз гелийн дээр хатуу бүлэг хэлбэрээр үзэгдэж, харагдах рназ байхгүй эсэхийг шалгах.

бие махбодийн цэвэр байдал

цэвэр байдал нь ≥95% буюу coomassie цэнхэр өнгөтэй sds-polyacrylamide гельээр тогтоогдсон байна.

ашиглалтын тэмдэглэл

Рибонуклеазын ингибитор нь pH-ийн өргөн хүрээнд (ph5. 5-9) идэвхтэй байдаг. стандарт rt болон in vitro транскрипц нь 1u/ul-ийн эцсийн агууламжтай рибонуклеазын ингибитор ашигладаг.

дэглэм