Poly a polymerase дараагийн үеийн дарааллын (ngs) бэлтгэлд

полиа полимераз(PAP) нь РНК молекулын 3’ төгсгөлд полимеразын сүүл нэмэхэд хариуцдаг гол ферментийн үйл ажиллагаа юм. Энэ үйл ажиллагаа нь РНК-ийн нийт тогтвортой байдал, тээвэрлэлт, орчуулгын хувьд чухал үүрэгтэй. Гэсэн хэдий ч NGS-ийн хүрээнд PAP нь дараалалд орохоос өмнө РНК дээжид A олигог нэмэх боломжийг олгодог бөгөөд ингэснээр янз бүрийн РНК эх үүсвэрээс өндөр чанартай өгөгдлийг авах боломжтой.

Полимеразын сүүл нэмэхийн ач холбогдол

mRNA-д полимеразын сүүл нэмэхтэй холбоотой олон давуу талууд байдаг. Нэгдүгээрт, A сүүл нь РНК молекулын тогтвортой байдлыг рибонуклеазын үйл ажиллагаанаас хамгаалахад тусалдаг. Хоёрдугаарт, полимеразын сүүл нь mRNA-д рибосомын наалдлыг дэмжих замаар орчуулгын эхлэлд үүрэг гүйцэтгэдэг. NGS бэлтгэлд полимеразын сүүлтэй mRNA-ыг генийн илэрхийллийн шинжилгээнд илүү төвлөрсөн байдлаар ашиглах боломжтой бөгөөд транскрипцийн өөрчлөлтүүдийг онцлон баяжуулж болно.

NGS дээж бэлтгэл

NGS-ийн ажлын урсгалд RNA дээжийг бэлтгэх дараах алхмууд орно: урвуу транскрипц, CDNA бүтээл, болон нэмэгдүүлэх. CDNA синтезийн үеэр сүүлийн cDNA молекулд полимеразын A хошууг оруулахын тулд Poly A полимераз нэмэх нь түгээмэл байдаг. Энэ өөрчлөлт нь номын сангийн нэмэгдэлт болон секвенцийн хувьд чухал бөгөөд энэ нь номын сангийн бэлтгэлд оролцож буй алхмуудын үр ашгийг нэмэгдүүлдэг.

RNA-Seq-д хэрэглээ

PAP нь RNA секвенцийн (RNA-Seq) хэрэглээнд маш их ашигтай бөгөөд энэ нь полимеразын A хошуутай mRNA-г илүү үр дүнтэй баяжуулах боломжийг олгодог. Энэ нь судлагдаж буй организмыг илүү тод транскриптомын түвшний зураг авахад тусалдаг. Иймээс, ийм сайжруулалт нь ялгаатай илэрхийлэгдсэн ген, альтернатив сплайсингийн үйл явдлууд, эсвэл бүр кодлогддоггүй RNA-уудыг тодорхойлоход тусалж чадна. Мөн, NGS бэлтгэлд PAP-ыг оруулах нь илүү амжилттай өгөгдлийг авах боломжийг олгодог.

NGS бэлтгэлд PAP нэмэх нь секвенцийн өгөгдлийн чанар, нарийвчлалыг ихээхэн сайжруулах боломжтой. Судалгаа үргэлжилсээр байгаа тул, шинжлэх ухаанчид транскриптомыг судлахад PAP-ийн ач холбогдол нь чухал хэвээр байх болно.