Өндөр цэвэр рибонуклеазын ингибиторын ээлжинд - RNase-ийн ингибиторын 40U/μl, cDNA синтез, молекуляр биологийн хэрэглээний үед РНК-ийг хамгаалахын тулд хамгийн тохиромжтой

Бүтээгдэхүүний тодорхойлолт

Манай өндөр цэвэршилттэй Рибонуклеаза Дамжуулагч Шингэнийг танилцуулж байна, rnase inhibitor 40 Нэгж/μl-ийн хэт концентрацитайгаар. Энэ шингэн нь РНХ-ийг боловсруулах явцад рибонуклеазуудаас хамгийн их хамгаалалтыг хангах зорилгоор онцгойлон боловсруулсан.

Гол онцлогууд

• Тод байдал: Рибонуклеазын ингибиторыг шинээр үйлдвэрлэж, өндөр цэвэр байдлыг хангахын тулд хатуу цэвэрлэгээг хийлгэж, туршилт хийхэд ямар ч саад учруулахгүй.

• Хэт төвлөрсөн формула: 40U/μl төвлөрөлтэй энэ ингибитор нь RNase-ийн цөөн хэмжээ ч үр дүнг эвдэж болзошгүй шаардлагыг шаарддаг хэрэглээний үр дүнтэй ашиглах боломжийг олгодог.

• Нэлээд өргөн спектрийн үйл ажиллагаа: Ингибитор нь RNase A, B, C болон бусад эндо болон экзорибонуклеаздын өргөн хүрээг үр дүнтэй нь хамарч, РНХ-ийн үзмэрүүдийг унагахаас хамгаалдаг.

• Стабилтай болон идэвхитэй: Температур, pH-ийн хурдан өөрчлөлтүүдэд стабилтай байдаг, тухайн ингибитор саналгүй цагдаагүй үедээ ч идэвхитэй байдаг.

• Хамтлагдаж буй: Автомат системүүдэд эсвэл үүнд хэрэглэгчээр зохион бүтээгдсэн амьдралуудад ашигладаг, cDNA-ын бүтээгдэхүүн болон нуклеин зүйн шилжүүлэлтийн техникүүдэд хамгийн их ашиглагддаг буфер, энзимүүдтэй хамтлагдаж буй.

Хэрэглээ

• cDNA-ын бүтээх: Реверс транскрипцийн хариултын үед RNase-ийн оролцоог хяналттай болгох, энэ нь синтезид бүтээгдэхүүний хэмжээгээс гадна тодорхойлолтыг сайжруулдаг.

• RNA-ын хуваасан, шаардлага: RNA-ын хуванцарлах, шилжүүлэх хүснэгтүүдэд ашигладаг, энэ нь хуваасан өмнө, дараа нь RNA-ын тодорхойлолтыг хадгалдаг.

• Северн Блотинг: Мембран дээр RNA-ыг хөрш болгоход RNase-ийн үйл ажиллагааг хяналттай болгох, энэ нь RNA-ын хэмжээг сайжруулдаг.

• qPCR болон RT-qPCR: Quantitative PCR, reverse transcription quantitative PCR асуудлуудад RNA template-ийг хамгаалах, энэ нь санамсаргүй байдлыг сайжруулдаг.

• RNA-Протеинийн холбогдох судалгаа: RNA молекулуудыг ко-иммунопречипитаци (RIP) болон бусад RNA-протеинийн холбогдлын орчны үед хамгаалахад ашигладаг.

Эх сурвалж

Э. coli эмзэг бактери нь хүний цөцгөөрөөс гаралтай Ribonuclease Inhibitor ген дээр тулгуурлагдсан рекомбинант клоныг илүүлдэг.

Хүнд төвлөрөл

40 U\/μl.

Нэгжийн тодорхойлолт

Нэг нэгж нь ribonuclease A-ийн 5 нанограммийн үйлчилгээг 50%-аар төхөөрөмжлөх шаардлагатай Recombinant Ribonuclease Inhibitor-ийн хэмжээнд тодорхойлогдсон.

Үйлчилгээ нь cytidine 2’3’-циклич монофосфатыг ribonuclease A-ар хидролизлөх үйлчилгээг төхөөрөмжлөхөөр тооцоолно.

Хадгалалтын буфер

20мM HEPES-KOH(PH7.6), 50мM KCl, 8мM DTT, 50%(v\/v) глицерол

Хадгалалт

-20°C-д хадгалах

Чанарын хяналт

Эндонуклеаз байхгүй

1μg Ламбда ДНХ нь 200 орнуудын Рибонуклеазын үргэлжлэгчтэй 16 цагийн туршлага 37°C-д явуулагдсан.

Туршлагын дараа, эндоген Нуклеазын байхгүйг шалгахын тулд Ламбда ДНХ нь этидийн бромидтой агароз гел дээр зөвхөн бүтэн болоод харгалзана.

Никкейсын байхгүй

1μg I төрлийн суперcoil pBR322 нь 200 орнуудын Рибонуклеазын үргэлжлэгчтэй 4 цагийн туршлага 37°C-д явуулагдсан.

Туршлагын дараа, суперcoil ДНХ нь этидийн бромидтой агароз гел дээр зөвхөн бүтэн болоод харгалзана. Никин эсвэл хуурах үзэгдэл байхгүй.

Эксонуклеазын байхгүй

1μg Ламбда ДНХ/ХиндIII маркер нь 200 орнуудын Рибонуклеазын үргэлжлэгчтэй 16 цагийн туршлага 37°C-д явуулагдсан.

Туршлагын дараа, Ламбда ДНХ/ХиндIII маркер нь 1% агароз гелээр хувааж, этидийн бромидтой өшгөнө. Маркерүүд нь бүтэн бандуудад байдаг, устасан үзэгдэлгүй.

РНase ба латент РНase-ын байхгүй

РНase үйлчилгээний байгаа эсэхийг шалгахын тулд 1уг РНК нь 200 орнуудын Рибонуклеазын үргэлжлэгчтэй 4 цагийн туршлага 37°C-д явуулагдсан.

Зэрэглэсний дараа, RNA нь этидийн бромидтой хамгаалсан агароз гель дээр тогтмол бүлэг гэж үзэгдэнэ, энд RNase-ийн харагдахgui байдал байгааг шалгахын тулд.

Хуучин RNase зэрэглэлийн байрлалыг шалгахын тулд, Ribonuclease Inhibitor-ийн 200 units нь 70°C температурт 15 минут байдлаар уламжлалтай болгоод, 1уг RNA-тай 37°C температурт 4 цагийн туршдаа зэрэглэсэн.

Зэрэглэсний дараа, RNA нь этидийн бромидтой хамгаалсан агароз гель дээр тогтмол бүлэг гэж үзэгдэнэ, энд RNase-ийн харагдахgui байдал байгааг шалгахын тулд.

Физик чимэг

SDS-полиакриламид гель Coomassie blue-ийн хөрвүүлэлтээр 95%-аас илүү чимэгтэй байдаг.

Ашиглахад

Ribonuclease Inhibitor нь их pH хэмжээнд (pH5.5-9) ажилладаг. RT стандарт, in vitro transcription-д Ribonuclease Inhibitor нь 1u/ul-ийн концентрацид ашигладаг.