өндөр цэвэр рибонуклеазын ингибиторын бодис - rnase inhibitor 40u/μl, CDNA синтез болон молекуляр биологийн хэрэглээний рна хамгаалалтын хувьд оптимал

бүтээгдэхүүний тодорхойлолтоор

Манай өндөр цэвэршилттэй Рибонуклеаза Дамжуулагч Шингэнийг танилцуулж байна,rnase inhibitor40 Нэгж/μl-ийн хэт концентрацитайгаар. Энэ шингэн нь РНХ-ийг боловсруулах явцад рибонуклеазуудаас хамгийн их хамгаалалтыг хангах зорилгоор онцгойлон боловсруулсан.

гол онцлог

• онцгой цэвэршил: Рибонуклеазын ингибиторыг шинээр үйлдвэрлэж, өндөр цэвэршилтийг хангахын тулд хатуу цэвэршилтэд оруулж, туршилт хийхэд ямар нэгэн саад учруулахгүй байхыг баталгаажуулдаг.

• хэт төвлөрсөн бэлтгэл: 40u/μl төвлөрөлтэй хэрэглэгддэг энэ ингибитор нь рназ нь бага хэмжээгээрээ үр дүнг нь хордуулж болзошгүй шаардлагыг шаарддаг хэрэглээний үр дүнтэй ашиглах боломжийг олгодог.

• өргөн спектрийн үйл ажиллагаа: ингибитор нь а, б, с арын асар олон төрлийн арын арын арын арын арын арын арын арын арын арын арын арын арын арын арын арын арын арын арын арын арын арын арын арын арын арын арын а

• тогтвортой, идэвхтэй: температур, ph-ийн нөхцөлд тогтвортой байхын тулд боловсруулсан ингибитор нь хадгалах үед болон янз бүрийн туршилтын протокол дээр идэвхтэй байдаг.

• нийцүүлэг: автоматжуулсан систем болон гар аргаар бэлтгэсэн реакцүүдтэй ашиглахад тохиромжтой, CDNA синтез, нуклеин хүчилтэй ажиллах техникэд их хэрэглэгддэг буфер, ферментүүдтэй бүрэн нийцдэг.

хэрэглээ

• CDNA синтез: эргэн шилжүүлэн бичүүлэх реакцийн үеэр rnase-ийн бохирдол үүсэхээс урьдчилан сэргийлэхэд чухал бөгөөд ингэснээр синтезлэгдсэн CDNA-ийн үр өгөөж, бүрэн бүтэн байдлыг сайжруулдаг.

• РНХ-г тусгаарлах, цэвэрлэх: РНХ-г тусгаарлахын өмнө болон дараа нь РНХ-гийн бүрэн бүтэн байдлыг хадгалахын тулд РНХ-г гаргаж авах багц, цэвэрлэх ажлын урсгалын чухал бүрэлдэхүүн хэсэг.

• Хойд цэгц: архаг хавтан дээр архаг хавтан үүсгэж болох архаг хавтан үйл ажиллагааг сааруулах замаар өндөр чанартай РНК-ийн шилжүүлэлт, хибридчлэлтийг хангадаг.

• qpcr, rt-qpcr: тоо хэмжээний pcr болон эргэн шилжүүлэн бичгийн тоо хэмжээний pcr шинжилгээний үед rna загваруудыг хамгаалах, мэдрэмт, онцлог байдлыг нэмэгдүүлэх.

• РН-бүрдлэгт бодисын харилцан үйлчлэл: хамтарсан дархлааны давхаршлын (rip) болон бусад РН-бүрдлэгт бодисын харилцан үйлчлэлтэй туршилт хийхэд РН-бүрдлэгт бодисын молекулуудыг хадгалдаг.

эх сурвалж

Хүний биедээс рибонуклеазын ингибитор генийг авч байгаа рекомбинантын клоныг илэрхийлдэг e. coli штамм

төвлөрөл

40 у/мл.

нэгжийн тодорхойлолт

нэгж нь 5ng-ийн рибонуклеаз а-ийн үйл ажиллагааг 50%-иар сааруулах шаардлагатай рекомбинантын рибонуклеазын ингибиторын хэмжээ гэж тодорхойлдог.

Асуудал нь цитидин 23- циклик монофосфатын рибонуклеаз а-ийн гидролизэд нөлөөлөхөөр хэмжигддэг.

хадгалах буфер

20mm hepes-koh ((ph7.6), 50mm kcl, 8mm dtt, 50% ((v/v) глицерол

хадгалах

-20°C-д хадгалах

чанарын хяналт

Энденуклеаз байхгүй

1μg ламбда ДНК-г 200 нэгж рибонуклеазын ингибитортой 37°C-д 16 цаг инкубацдаг.

Ургацлахын дараа ламбда ДНК-г этидийн бромдтой бодитой агарозын гелд хамаарахгүйгээр үзэгдэх эндонуклеаз байхгүй эсэхийг шалгахын тулд үзэгддэг.

Никаз байхгүй

1μg I төрлийн supercoiled pbr322 нь 200 нэгж рибонуклеазын ингибитоор 37°C-д 4 цаг инкубацдаг.

Ургацлахын дараа этидийн бромдтой бодитой агарозын гелд хэтэрсэн ДНК-г үзэгдэх ялгаралт эсвэл хагалгагүй байдлыг шалгахын тулд үзэгдэх боломжтой.

экзонуклеаз байхгүй

1μg lambda dna/hindiii маркерийг 200 нэгж рибонуклеазын ингибитортой 37°C-д 16 цаг инкубацдаг.

Ургацлахын дараа ламбда ДНК/индиии маркерийг 1% агароз гельээр ялгаж, этидийн бромдидээр бодоод, маркер нь халдваргүй, бүтэн бүлэг хэвээр үлддэг.

rnase-ийн дутагдал, rnase-ийн нуугдмал дутагдал

rnase-ийн идэвхжилт илэрсэн эсэхийг шалгахын тулд 1 уг rna-г 200 нэгж рибонуклеазын ингибитортой 37°C-д 4 цаг инкубацдаг.

Ургацлалтын дараа РНХ-г этидийн бромдтой бодитой агароз гелийн дээр хатуу бүлэг хэлбэрээр үзэгдэж, харагдах рназ байхгүй эсэхийг шалгах.

рназ идэвхжилт илрэхгүй эсэхийг шалгахын тулд 200 нэгж рибонуклеазын ингибиторыг 70°C-д 15 минутын турш халуун цэврийн дулаантайгаар дэнатурилж, 37°C-д 1 уг рна-тай 4 цаг инкубацдаг.

Ургацлалтын дараа РНХ-г этидийн бромдтой бодитой агароз гелийн дээр хатуу бүлэг хэлбэрээр үзэгдэж, харагдах рназ байхгүй эсэхийг шалгах.

бие махбодийн цэвэр байдал

цэвэр байдал нь ≥95% буюу coomassie цэнхэр өнгөтэй sds-polyacrylamide гельээр тогтоогдсон байна.

ашиглалтын тэмдэглэл

Рибонуклеазын ингибитор нь pH-ийн өргөн хүрээнд (ph5. 5-9) идэвхтэй байдаг. стандарт rt болон in vitro транскрипц нь 1u/ul-ийн эцсийн агууламжтай рибонуклеазын ингибитор ашигладаг.