ڕۆلی گشتی لە پارچەکردنی Pfu DNA Polymerase لە بیولۆژییەی مولێکولار

I. Pêşkeftin bo PFU DNA polymerase

پۆلیمەرازە DNAی Pfu ھەڵبەرێکی تر داها کەسایەکی زۆر لازەم لە بایۆلۆژییە کوردی، ئەو پرۆدوكتێکە لە باشی باکتریای هیپەرتەرموفیل Pyrococcus furiosus دەڕوونە. ئەم ئەنزایمە بەهۆی فیدەلیتی زۆر گور و پرۆسەسیتیتی خۆشەویزی چەندین کاربەردنەوەیەکاندا بەکاردێت، لەگەڵ سەبارەتەوەی PCR بەرزکردنەوە لەسەر رەسپۆنستەکانی سیکوئێنسەکان. لەگەڵ باشکردنەوەی Taq پۆلیمەرازەکەی کە دەخات لە هەڵەکان، Pfu پۆلیمەرازە DNA بە دەقی گەورەیەکی دەتوانێت DNA بە دروستی بەردەوام بکات و هەڵەکان لە دەروونی دەستکاری کردنەوەیەکاندا بە شێوەیەکی زۆر بەرامبەر بکات.

II. تایبەتمەندییەکانی پۆلیمەرازە Pfu DNA

Biçayekî ku li ser Pfu DNA polymerase destpêk dike ev e, termostabilîteya wê ye. Wê li her dem aktîf dihêlîne li temperatûrên pêşanî 95°C de, ku ev ewle bi karibî taybetirî li ser aplikasyonên piştî temperatûr ên nermalav de wek long PCR û nested PCR dike. Li derê, vê enzîm dikare karanîna proofreading ji bo exonuclease li nav 3’ der 5’ bibîne ku fîdelîteya replicasyonê veşart dike. Ev barêber, her dem ku baza mismatch di nav derveyî tiştin, Pfu DNA polymerase dikare wan bibîne û wergerandin ku prodûktê ya dawî yên jî li ser şablonê ya aslî ya xwe benasîne.

III. Aplikasyonên Pfu DNA Polymerase li Ser Biyolojiya Molekular

لای کاتێک لە تکنیکانی بیولۆژییەکانی مۆلێکولار دڵنیایان ئەوەی پۆلیمەرەزی DNAی Pfu بکاربێنەون کەسەی ڕێکخراوەکانی خاصلەی هەیە کە لەگەڵ ئەوەدا دەگیرێت. فیدالیتی سەربازی کە ئەم ئەنزایمە لە ناوەکی PCR دەداتەوە ژمارەی گرنگەکە بووە کاتێک کە دەستپێکی سەرباز لازمە دەبێت، مثلا لە کلوندانەوەیان یان کاتێک کە ئامادەبوون لەسەری سیکوانسکردنەوە. پرۆسەسیویتیەکەی هەروەها دەستنێسێت کۆپیکردنەوەی سەرکەوتوو لە DNAکانی گەورە کە لەسەر ئەو ستراتەژیەکانەی بە کلوندانەوە یان تەکنیکانی تر لەشێوەی SDA/LMDA کە لە تەکنیکانی پایروسیکوانسدا بەکارهێناوە، مانند سیستەمی Roche’s GS FLX]. لەگەڵ PCR، بەکارهێنانێکی تر لە پۆلیمەرەزی DNAی Pfu هەیە وەک ئەوەیەکەی موتاسیۆنی سەرچاوەیەکە بۆ دەستکاری کەواتە دووبارەکردنەوەی سەرکەوتوو ئەوەی دەست دەدات کە گۆڕانکاریەکانی خاکە لەسەر سەرچاوەکە دەکرێت بێ هیچ جێگیری تایبەت.

IV. ANALYZEÎ KRITIK BÎ POLIMERASEK DNA YAN EWER

پۆلیمەراز DNAی Pfu دەستە خراوەکانی ڕێگایی و هەڵسەری ژار لەگەڵ پۆلیمەرازەکانی تر لە شێوەی Taq یان Vent کەمترە. لە گشتی بەرەوەی Pfu کە زیاتر گرتەوە و باشترە، Taq فانکشنەکانی ڕێگایی نیە، لەبەر ئەوەدا نەدۆزرە بوونە لە کاروبارەکانی بە درێژایی ڕاستەقینە. هاوشێوە، لەبەر ئەوەی پۆلیمەرازەکانی تری ڕاستەقینەیەکانی تر لە شێوەی پۆلیمەراز DNAی Vent هەیە، ئەو ناتوانێت هەمان سطحی هەڵسەری ژاری Pfu بخۆتێبێت، لەبەر ئەوەدا ئەو کەمتر مناسبتە لەسەر کاروبارەکانی ڕێکخراوەکانی ژار.

V. چالەکان و ڕێکخوازیەکان لەسەر کاربەکردنی پۆلیمەراز DNAی Pfu

ئەما، کاربەکردن لە PFU DNA polymerase دیاریت بکەرێت دوای ئەو شانسە کە لەگەڵی هەیە. مثلا، ڕۆشتنەوەی دەستکارییەکەی سەرچاوەکەدا دەتوانێت لە کاتێکدا لەسەر پاشی ڕێکخستنی PCR کەمترین نتیجەیەک بدۆزێت لەگەڵ پۆلیمەراتەکانی تەماشاکەرتە لە خاڵەکان. هەروەها، ئەوەی ڕێژەیەکی باشتر لەسەر پۆلیمەراتەی DNAی Pfu بکەرێت ئەوەی ڕێکخستنەوەی ئەوەی ڕێگەیەکی سەرکەوتوویە وەک یۆنەکانی دووجەیی و pHیەکەی دەبێت بە شێوەیەکی زۆر ڕێکخستنەوەیەک بەرگرێتەوە. فێریتر، بەکارهێنانی ئەم ئەنزایمە دەتوانێت جیاوازییەکی پرۆژەیەکی گەورەیەک بێت یان کەسەکانی گەورەیەکی ڕێکخستنەوەیەک بەرگرێتەوە.

VÎ. دیدارەوەی سەرەتاڵ و پێشرۆکان

واریانتە نوێکی پۆلیمەراتەی DNAی Pfuیەکەی دەتوانێت بە ئەوەی ڕێکخستنەوەی ئەوەی ڕێگەیەکی باشتر بێت یان ئەوەی ڕێگەیەکی کەمتری ڕێکخستنەوەیەک بێت بەرز بێتەوە. ئەنجامدانەوەی پڕۆتئێنەکەی دەتوانێت لەسەر بەرزکردنی ئەفەکتەکەی سەرچاوەکەدا بەرپرسی بکرێت یان ئەوەی ڕێگەیەکی باشتر بێت لەسەر ئەوەی ئەوەی ڕێگەیەکی باشتر بێت بەرگرێتەوە. هەروەها، ئەوەی ڕێگەیەکی باشتر لەسەر ئەوەی ڕێگەیەکی باشتر بێت بەرگرێتەوە.

پێنجەم. دلایی

بۆ ئەوەی ڕێکخستن، پۆلیمەرازە DNAی Pfu ژمارەیەکی گرینگ لە بیولوژیی مولێکولارە کە بەهۆی فیدیلیتی و تەواوییەکانی چەندێتییەکەی خوoshەوە. ئەمەش دەکاتەوە لەسەر ئەوەی ڕێکخستنی سیکوئەنسەکانی DNA بە زانیاری زۆر لەسەر هەموو جۆرەكانی نیشتمان و بەکارهێنانی چاودێرە لەسەر ئەوەی ڕێکخستنی سیکوئەنسەکانی DNA بە زانیاری زۆر لەسەر هەموو جۆرەكانی نیشتمان و بەکارهێنانی چاودێرە. لەوەی کە دانەدانەکان دەبێت کۆتایی دەدەن بە سەرچاوەکانی ژێنا، گرنگی بەکارهێنانی گەرەوەکانی چەندێتییەکەیەکانی چەندێتییەکانی Pfu DNA پۆلیمەرازە دەتوانێت زیاتر بێت و ئەمەش دەکاتەوە لەسەر ئەوەی هەروەها لە کاتێکدا و لە ڕاستەوخۆی بیولوژیی نەوزەکاندا بەکاربێت.