bişkoka ribonukleazê, rnase inhibitor 40u

ji bo ku ji bo ku ji bo ku ji bo ku ji bo ku ji bo ku ji bo ku ji bo ku ji bo ku ji bo ku ji bo ku ji bo ku ji bo ku ji bo ku ji bo ku ji bo ku ji bo ku ji bo ku ji bo ku ji bo ku ji bo ku ji bo ku ji bo ku ji bo ku ji bo ku ji bo ku

çavkaniya

e. coli ku kloneke rekombînanta ku ji placenta mirovan genê înîbîterê ribonuklease dihewîne.

konsantrasyon

40 u/μl.

yekîneya

yek yekîneyek wek miqdara inhibitorê ribonuclease ya rekombînan tê pênasînkirin ku pêwîst e ji bo pênasîna çalakiya 5ng ya ribonuclease a bi rêjeya 50% tê pênasîn kirin.

çalakiya bi rêya astengkirina hydrolysis ji cytidine 23-cyclic monophosphate ji aliyê ribonuclease a pîvandî ye.

bufferê depoyê

20mm hepes-koh ((ph7.6), 50mm kcl, 8mm dtt, 50% ((v/v) gliserol

depoya

di -20°C de bêne veşartin

kontrolkirina kalîteyê

ne hebûna endonukleazê
1μg DNA ya lambda bi 200 yekîneyên inhibitorê ribonuclease ji bo 16 saetan di 37 °C de têne kuşt.
Piştî ku diçû, DNAya lambda wek bêbandor li ser gelê agaroseyê ku bi ethidium bromide ve têne qewitandin tê nîşandan da ku bêdengiya endonukleazê dîtbar were piştrastkirin.

nebûna nikase
1μg type i supercoiled pbr322 bi 200 yekîneyên inhibitor ribonuclease ji bo 4 saetan di 37 °C de tê incubated.
Piştî ku diçû, DNAya supercoiled li ser gelê agaroseyê ku bi ethidium bromide ve têne qewitandin tê dîtin da ku bêyî ku ji berçavkirin an qutkirinê were dîtin.

nebûna exonuclease
1μg ji markêrên lambda dna/hindiii bi 200 yekîneyên inhibitorê ribonuclease ji bo 16 saetan di 37 °C de têne kuşt.
Piştî ku diçînin, markêrên DNA-ya lambda/hindiii bi gelê agaroseyê ya 1% ve tên veqetandin û bi bromîda etidiyumê tên rengkirin. Markêrên bêyî ku bêne şûştin, wek şûşeyên bêkûçî dimînin.

nebûna rnase û rnaseya nepenî
ji bo ceribandina hebûna çalakiya rnase, 1ug rna bi 200 yekîneyên inhibitor ribonuclease ji bo 4 saetan di 37 °C de tê incubated.
Piştî ku diçû, RNA wek bandek bêbandor li ser gelê agaroseyê ku bi ethidium bromide ve têne qewitandin tê nîşandan da ku nebûna rnaseyê dîtbar were piştrastkirin.
ji bo ceribandina hebûna çalakiya rnase ya nepenî, 200 yekîneyên inhibitorê ribonuclease di 70 °C de ji bo 15 deqîqeyan germî-denatured û bi 1ug rna ji bo 4 saetan di 37 °C de têne kuşt.
Piştî ku diçû, RNA wek bandek bêbandor li ser gelê agaroseyê ku bi ethidium bromide ve têne qewitandin tê nîşandan da ku nebûna rnaseyê dîtbar were piştrastkirin.

paqijiya fîzîkî

paqijî ≥95% e, wek ku bi gelê sds-polyacrylamide bi rengê coomassie blue tê dîtin.

nota bikaranînê

bi awayekî standard rt û transkripsiyona in vitro bi kar anîn bi rêya inhibîtorê ribonukleazê di konsantrasyoneke dawî ya 1u/ul de.

rêz