polî a polîmerase di pêşniyarên rêziknameya nifşê din (ngs) de

polî a polîmerase(PAP) çalakiyek enzymatîk e ku berpirsyarî ye ji bo zêdekirina poly-A tailê li 3’ dawiya molekulan RNA. Ev çalakî rolê girîng heye di stabîlîtê, veguhastin û wergerandina RNA de. Di çarçoveya NGS de, lê belê, PAP destûr dide zêdekirina A oligo li sampelan RNA berî seqûnsîngê da ku daneyên bilind qîmet ji çavkanî RNA yên cuda were girtin.

Girîngiya Zêdekirina Poly A Tailing

Zêdetirî feydeyên têkildar bi zêdekirina poly A tailê li mRNA heye. Yekem car, A tail alîkarî dike di pêşkeftina stabîlîtê ya molekulan RNA de li dijî çalakiyên ribonuclease ji hêla exonucleases ve. Duyem, poly A tail rolê heye li ser destpêka wergerandina bi teşwîqa girêdanê ribozomê li mRNA. Di rewşa amadekirina NGS de, mRNA yên poly A-tailed bi hêsanî dikarin ji bo analizên zêdetir a ekspresiyona gene yên diyarî bi guherandina transcriptan wekî ku dikarin taybetî zêde bibe.

Amadekirina Sampel NGS

Karbardana NGS di nav dema xebatê de pêşkeftina nimûneyên RNA tê de, ku pêdivî ye ku ev gava xebatên jêrîn têne: vegerandina transkrîptîonê, çêkirina CDNA, û zêdekirina. Hêdî, zêdekirina Polî A polymerase di dema çêkirina CDNA de gelekî hêsan e da ku polî-A tail di molekûlên cDNA yên dawî de têne zêdekirin. Ev guherandin girîng e ji bo zêdekirina pirtûkê û seqûnsîngê, ji ber ku ew karîgeriya gava xebatên têkildar di pêşkeftina pirtûkên de zêde dike.

Serlêdan di RNA-Seq de

PAP jî di serlêdanên RNA seqûnsîngê (RNA-Seq) de gelekî karîger e, ji ber ku ew destûr dide ku zêdetir zêdekirina mRNA yên polî A-tailed bibe. Ev di girtina wêneyek zêde çêkirî ya transcriptome ya organismê ku tê xebitîn de alîkarî dike. Ji ber vê yekê, ev pêşkeftin dikare alîkarî bike di nasîna gene yên ku bi awayekî cuda têne xebitîn, bûyerên splicing yên alternatîf, an jî RNA yên ne-kodîng. Her weha, zêdekirina PAP di pêşkeftina NGS de dike ku daneyên zêde hêvîdar têne girtin.

Zêdekirina PAP di amadehiyên NGS de dikare gelek baştir bike taybetmendiyê û rastiyê ya daneyên seqansê. Çi girîng e, wekî ku lêkolîn berdewam dike, girîngiya PAP ji bo destûrê danê ku zanistvanan dikarin transcriptome lêkolîn bikin, herdem girîng e.