la taq DNA polymerase, polymerase pcr dirêj
- pêşniyar
pêşniyar
Long PCRtaq polîmerase DNA, 5U/μl
şîrovekirin
la taq DNA polymerase sê caran ji taq DNA polymerase bilindtir e
polîmerase pcr dirêj ku bi sinerjîkî berhemên pcr dirêj bi berhem û dilsoziya mezintir ji taq polîmerase DNA bi tenê çêbikin.
bi rastî jî, di dema ku PCR tê bikaranîn, bi rastî jî, bi rastî jî, bi rastî jî, bi rastî jî, bi rastî jî, bi rastî jî, bi rastî jî, bi rastî jî, bi rastî jî, bi rastî jî, bi rastî jî, bi rastî jî, bi rastî jî, bi rastî jî, bi rastî jî, bi rastî jî, bi
la taq ji bo çêkirina ampliconên pir dirêj hatiye çêkirin: heta 40 kb bi DNA-ya vîrusî û heta 15 kb bi şablonên DNA-ya genomîk. buffer la taqê bi taybetî hatiye çêkirin DNA-yê di dema çirûska germê ya dirêj de ji depurînasyon û nicking diparêze.
berhemên pcr bi la taq DNA polymerase çêkirî bi piranî 3'-da tailed in, ku dikare di ta vector klonkirin.
taybetmendiyên
- berhemên pcr dirêj
- heta 40 kb bi DNA-ya vîrusî wek şablon
- heta 15 kb bi DNAya genomîk wek şablon
- ideal ji bo şablonên dewlemend ên gc heta 85% gc.
- bi rastî jî, bi rastî jî, bi rastî jî, bi rastî jî, bi rastî jî, bi rastî jî, bi rastî jî, bi rastî jî, bi rastî jî, bi rastî jî, bi rastî jî, bi rastî jî, bi rastî jî, bi rastî jî, bi rastî jî, bi rastî jî, bi rastî jî, bi rastî jî, bi rastî jî, bi rastî
- bi berhemên bilind. nukleotîdên guhertî tê de hene.
kontrolkirina kalîteyê
bi awayekî fonksîyonel di çêkirina 40 kb amplicon bi DNA lambda wek şablon hate ceribandin.
konsantrasyon: 5 u/μl
depoya
buffer depo: Enzîma di: 20mm tris-hcl (ph 8.0); 0.1mm edta; 1mm dtt; 100mm kcl; stabilîzer; 50% gliserol de tê peyda kirin.
depo: di -20°C de depo bikin.
bertek
berhevoka pcr berhevkirin û şertên thermal cycle pêşniyar: herikîna tenê nimûneya ku bi 20kb DNA genomîk mirov wek şablonê, ku tenê ji bo referansê, ew dikare li gor dirêjî û rêzkirina şablonê û primerê de bêne rêzkirin.
pêkhateya | volume | konsantrasyonê dawî |
şablon | DNA < 1 ug | wek pêwîstî |
pêşînkerê pêşînkerê (10 μm) | 1 μl | 0.2-0.4 μm her yek |
primerê veguherî (10 μm) | 1 μl | 0.2-0.4 μm her yek |
10x la taq buffer | 5 μl | 1x |
2.5 mm dntps | 4 μl | 0.2 mm |
la taq polîmerase DNA | 0.5μl | 2.5 yekîneyî |
ddh2o ji bo volume dawî | 50μl | ne pêkan e |
94°c 3 deqîqe
94°c 30 sec
55°c 30 sec 30 cycle
72°C 1 deqîqe
72°C 5 deqîqe.
rêz
pc08 | la taq polîmerase DNA | polîmeraseya DNA ya pcr taq dirêj, 5u/μl |