پرسیارکردنی گشتیی M-MLV Reverse Transcriptase لە بایۆلۆجییەکانی مولێکولی

Fêmkirin m-mlv reverse transcriptase

M-MLV Reverse Transcriptase, yek li serên enzyme'ên herêmî ên ji virûsê Moloney murîn leukemia (M-MLV) derbas kirî, di biyolojî ya molèkûlî de aliyê. Ev tiştê hilbijêrîna RNA ya evîstkirî yên teka tekilê berve DNA (cDNA) di pirocesa herêmî ya reverse transcription de. Neqadariya ew ji bo sintezkirina kopîyan cDNA ya derveyî re nehatiye ji bo pirsgirêkanên herî çend mînak RT-qPCR û klônkerdan mRNA ya herêmî.

Aplîkasyonên di sintezeya cDNA de

Li sintezeya cDNA, fonksiyona nêzîka M-MLV Reverse Transcriptase e sintezeya cDNA. Ev ji bo tênevirina temlateên RNA ya pesandokî re ku dikarin ji bo amplifikasî ya PCR an jimarandina librarîan ve were bikar anîn. Processivity a lêgerînê û dengê paşmende ya enzyme keyfiyeta aliyê ji bo nivîsa sequencê ya RNA ya orijinal re di DNA ya taybetî de.

Rol li RT-qPCR

لە بارەی ئەوەی کۆپیەکانی پۆلیمەرەزی ژێرەکی (RT-qPCR) بکەن، RNA لە گامی یەکەمدا تەنها لە فورمی cDNA دەگیرێت لەسەر مەوتەبەرە M-MLV Reverse Transcriptase. ئەم cDNA وەک ڕێگایەکی خاڵکراوەیە لە گەڕانی qPCR کە دەست پێ بکات بۆ سەبارەتی ژمارەکانی نیشاندانی ژینەکان. باشتربوونەوەیەکی لەسەر مەوتەبەرە M-MLV Reverse Transcriptase ڕەزultەی باشترێک هەڵدەبێت چونکە زانیاری کوردەکەیەکان لە گەڕانی cDNA دەکات. پێشوویەکان لەسەر مەوتەبەرانی تر

پێشووەکانێکی تر لە بین M-MLV Reverse Transcriptase ویانەوە لە مەوتەبەرانی ترمانەوە وەک AMV (ئەوەی Myeloblastosis Virus) RT هەیە کە مەوتەبەرانی تریانەوە هەیە. پرۆسەکردنەکەی زیاتر و بەهایەکی کەمتر لە هەڵگرێتنەوەی هەڵگرێتەوەی نەخۆشیانەوەیەکانیان دەکات کە بەردەوامی زیاتر و کاریگەری زیاتر لە گەڕانی cDNAی ڕێکەوەیەکی زۆرتر لە AMV RT و مەوتەبەرانی ترەوە. ئەم ڕەگەکانە دەتوانن بەرەو ئەوەی مەوتەبەرێکی باشتر بێت بە شێوەیەکی تر لەسەر مەوتەبەرانی ترداوە کەوانەیەکانی باشترەکانی cDNA بۆ بەکارهێنانی ئەکسپێریمانە.

بەرزبەرکردنی شارستانەکانی گەڕان

بەرزبەرکردنی شارستانەکانی گەڕان گرنگەکەیە کاتێک بەکارهێنا m-mlv reverse transcriptase بۆ ئەوەی ڕێکخستنی ئەو بەرداربێت. کاروباری ئەنزایم و فیدالیتی هەڵگرێتی دەتوانێت لە سەرەتایی پێکەوەی pH، دەرچوون و کۆنسنتراسیۆنی مەگنزیوم تاوشێنێتەوە. ئەم پارامێترەیان باید لە باشدا دابەش بکەن ئەگەر ئەوان بیرکاران دەخواهێن ئەنجامەکانی ژمارەیەکی وەکایی و دەقیقی بەرامبەر لە سەرچاوەکانی ئەکسپێریمانەکانیان بە شێوەیەکی بەختیار بنێن کە لەگەڵ Reverse Transcriptase-ی M-MLV هەیە.

کاتالێز کردنی نیشتمەندییەکان ژینەیی و چالاکیەکان

Reverse Transcriptase-ی M-MLV ناچێت تەنها لە زانستی گشتیاری دەکات بلكە هەروەها دەستی بە نیشتمەندییەکان ژینەیی و چالاکیەکانی ڕێکی دەکات. لەگەڵ ئەوەی دووجینەیەکی دەقیق لە سیکوئەنسەکانی RNA دەدات، ئەوە لە دەستنخۆش بوونی ڕێگەکانی ژینەی بەکارهێنراوە و هەروەها درێژبوونی مەکانیزمەکانی بەماریەکان دەکات. لەگەڵ ئەوەی کەسپێدانی ژینەیی دەستنیشان دەکرێت، ئەم ئەنزايمە دەتوانێت رۆلێکی گوری لە چالاکیەکانی دواتر بەجێ بکات لەگەڵ کۆپی کردنی دووجینەیەکی وەکایی لە RNAکانی چالاکیەکان بۆ DNA بۆ ئەوەی لە دروستکردنەوەی ڕوودادەکان لە درون سەلەکان بەکاربهێنێت.

پاشەکەوتی باشەکانی زانست

Demanê M-MLV Reverse Transcriptase li ser navînên zanistî biguherîne. Protokollên nû û teghîkên nû didebin ên ku wekî qetî ya xüsêandin ên taybetir yên în zanîarê bimînin. Dûr le re şayadariyê, demên zêdeyî ya M-MLV Reverse Transcriptase divê bi dest pê kirin da ku vê yekê li ser herêmî ziyarî bi kêmî wergirtin.