תפקיד ויישומים של m-mlv טרנסקריפטאז הפוך בביולוגיה מולקולרית

אנזימים היו מרכזיים לתגובות ביוכימיות שונות ביחס לשדה הדינמי תמיד של ביולוגיה מולקולרית.m-mlv טרנסקריפטזה הפוכה(m-mlv rt), שהוא אחד מהאנזימים האלה, זכה לאחרונה לתשומת לב רבה מכיוון שהוא מסוגל לסנתז CDNA מדפסי RNA. האנזים הזה, אשר נלקח ממוליני לוקמיה לבעלי הפרק (m-mlv), מוצא שימוש נרחב בביצועים של ג

המבנה והפונקציה של m-mlv טרנסקריפטזה הפוכה

m-mlv טרנסקריפטאז הפוך פועל כפולימרז DNA תלוי DNA עם פעילות של DNA פולימרז תלוי DNA ו- ribonuclease h (rnase h). הוא מזהה תבניות RNA ומבצע סינתזה של חוט CDNA באמצעות dntps כסובסטרטים. פעילות rnase

יישומים של m-mlv טרנסקריפטזה הפוכה

סינתזה של CDNA: שיטות טרנסקריפציה הפוכה המשתמשים m-mlv rt הן תהליכים נפוצים המשמשים לשינוי תוכן RNA לתוך CDNA. עבור מחקרים במורד הזרם כולל PCR כמותי, ניתוח ביטוי גנים או בניית ספריה CDNA טכניקה זו בלתי

שיבוט גנים: באמצעות m-mlv rt, חוקרים יכולים לשבט גנים ספציפיים מדגימות RNA שלהם. כתוצאה מכך, גנים מסוימים יכולים להיות מבודדים ומאופקים כך שניתן לנתח אותם יותר במונחים של פונקציה.

ניתוח ביטוי: שלב חיוני בכל טכניקות ניתוח ביטוי כגון QPCR או ניתוח microarray כרוך בסינתזת CDNAS המורכבת על ידי האנזים באמצעות פעילות rnase h שלו. באמצעות דרכים אלה מדענים מקבלים הזדמנות לגלות כיצד גנים מביעים את עצמם בצורה שונה בדגי

גנומיקה פונקציונלית: בגנומיקה פונקציונלית, m-mlv rt משמש להכין ספריות CDNA מאוכלוסיות RNA מורכבות. ספריות אלה נבדקות לאחר מכן עבור גנים עם פונקציות או פנוטיפים ספציפיים ובכך חושפים תובנות חדשות על פונ

יתרונות ושיקולים

ל-m-mlv reverse transcriptase יש מספר יתרונות כגון יעילות גבוהה, ספציפיות ושכפוליות. עם זאת, יש לציין כי האנזים פועל היטב בתנאים ספציפיים כמו טמפרטורה אופטימלית, ערכי PH כמו גם ריכוז מלח. לפעמים במהלך סינתזת CDNA יש פיר

לסיכום, m-mlv טרנסקריפטאז הפוכה היא כלי מועיל במחקר ביולוגיה מולקולרית לסינתזת CDNA מדפסי RNA ליישומים שונים. כליה גנים, ניתוח ביטוי ולימודי גנומיקה פונקציונלית מסתמכים מאוד על m-mlv rt מכיוון שיש לו