מעכבי ריבון נוקלאזה, מעכבי רנאזה

מעכב ריבוננוקלייזה של השליה האנושית, 40 יו/μl

מקור

זן של E. coli המביע קלון רוקומביננטי שנושא גן מעכב ריבון נוקלאזה משטף האנושי.

ריכוז

40 יו/מיליטר.

הגדרה של יחידה

יחידה אחת מוגדרת ככמות של מעכב ריבונקולייז מחודש הנדרש כדי להדחיק את הפעילות של 5ng של ריבונקולייז א ב 50%.

הפעילות נמדדת על ידי מעכבת ההידרוליזה של סיטידין 23- סיקלי מונופוספייט על ידי ריבונוקלייז א.

מחסום אחסון

20 מ"מ של היפס-קוה (ph7.6), 50 מ"מ של ק"ל, 8 מ"מ של דט, 50% (v/v) של גליצרין

אחסון

שמור ב -20°C

בקרת איכות

חוסר אנדונוקליאז
1μg של DNA למבדה מונח עם 200 יחידות של מעכב ריבון נוקלייזה במשך 16 שעות ב 37°C.
לאחר ההדבקה, ה-DNA של הלמדה מתבונן כשלם על ג'ל אגרוז מלוכלך בברומיד אתידיום כדי לאמת את היעדר אנדונוקליאז נראית.

חוסר ניקזה
1μg של pbr322 מסוג I סופר-סופג עם 200 יחידות של מעכב ריבון נוקלייז במשך 4 שעות ב 37°C.
לאחר ההדבקה, ה-DNA המוגולל במעגל אגרוז מלוכלך בברומיד אתידיום כדי לוודא שאין חותכים או חתכים גלויים.

חוסר של אקזונוקליאז
1μg של סימנים למדה DNA/hindiii מונחים ב-200 יחידות של מעכב ריבון נוקלייזה במשך 16 שעות ב 37°C.
לאחר ההדבקה, סימני ה-Lambda DNA/hindiii נפרדים על ידי 1% ג'ל אגרוז ומודבקים עם ethidium bromide. הסימנים נשארים כבטיסים שלמים ללא חשיפה.

חוסר rnase ו rnase latent
כדי לבדוק את נוכחות פעילות rnase, 1ug של rna הוא מונח עם 200 יחידות של מעכב ריבון נוקלייז במשך 4 שעות ב 37°C.
לאחר ההדבקה, ה-RNA מתבונן כבטיבת שלמה על ג'ל אגרוז מלוכלך בברומיד אתידיום כדי לוודא את היעדר rnase גלוי.
כדי לבדוק את נוכחות פעילות rnase latent, 200 יחידות של מעכב ריבון נוקלייז הוא חום-דנוטור ב 70°C במשך 15 דקות ונקב עם 1ug של rna במשך 4 שעות ב 37°C.
לאחר ההדבקה, ה-RNA מתבונן כבטיבת שלמה על ג'ל אגרוז מלוכלך בברומיד אתידיום כדי לוודא את היעדר rnase גלוי.

טוהר פיזי

טוהר ≥95% כפי שנגזר על ידי ג'ל sds-polyacrylamide עם צבע כחול coomassie.

הערה לשימוש

תרגום rt סטנדרטי ו in vitro משתמשת inhibitor ribonuclease ב ריכוז סופי של 1u / ul.

סדר