מונע ריבונוקלאז, מנע RNase 40U μl

מונע ריבונוקלאז הומני רקורסיבי מפלצנטה, 40U/μl

מקור

תבנית E. coli המבטאת קローン רקורסיבי שמכיל את גן מעצור ריבונוקלז מהפלטנה האנושית.

ריכוז

40 U\/μl.

הגדרת יחידה

יחידה אחת מוגדרת ככמות של מעצור ריבונוקלז רקורסיבי הנחוצה כדי להמעיט ב-50% את פעילות 5 נג'גרם של ריבונוקלז A.

הפעילות מודדת על ידי חסימת ההידרוליזה של ציטידין 2’3’-סיקלי מונופוספט על ידי ריבונוקלז A.

מכלית אחסון

20mM HEPES-KOH(PH7.6), 50mM KCl, 8mM DTT, 50%(v\/v)ไกลצירול

אחסון

שמור בטמפרטורה של -20°C

בקרת איכות

חוסראין אנדונוקלז
1μg של DNA למדא מטמעת עם 200 יחידות של חסימת ריבונוקלאז במשך 16 שעות בטמפרטורה של 37°C.
לאחר הטמעה, ה-DNA של למדא נראית כשלמה על גל אגרוז עם סימון ברובידום אתידיים כדי לוודא את היעדרן של אנזימים קיצורי-DNA נראים.

היעדרות של Nickase
1μg של pBR322 מסופרקלית מסוג I מטמעת עם 200 יחידות של חסימת ריבונוקלאז במשך 4 שעות בטמפרטורה של 37°C.
לאחר הטמעה, ה-DNA הסופרקליתי נצפה על גל אגרוז עם סימון ברובידום אתידיים כדי לוודא את היעדרו של חיתוך או קריעת נראית.

היעדרות של Exonuclease
1μg של Lambda DNA/HindIII Markers מטמעת עם 200 יחידות של חסימת ריבונוקלאז במשך 16 שעות בטמפרטורה של 37°C.
לאחר הטמעה, Lambda DNA/HindIII Markers מופרד על ידי גל אגרוז ב-1% ומסומן עם ברובידום אתידיים. המציינים נשארים כפסים שלמים ללא התפשטות.

היעדרות של RNase ו-RNase לא פעילה
כדי לבדוק את הימצאותה של פעילות RNase, 1μg של RNA מטמעת עם 200 יחידות של חסימת ריבונוקלאז במשך 4 שעות בטמפרטורה של 37°C.
לאחר התאמה, ה-RNA נראת כתה שלמה על גל אגארוז עם סימון ברומיד אתידיום כדי לוודא את חוסר הימצאותן של RNase נראות.
כדי לבדוק את קיומה של פעילות RNase לא-פעילה, 200 יחידות של מונע ריבונוקלאז מתפרקות תחת חום בטמפרטורה של 70°C במשך 15 דקות והופכות לתוך התאמה עם 1µg של RNA במשך 4 שעות בטמפרטורה של 37°C.
לאחר התאמה, ה-RNA נראת כתה שלמה על גל אגארוז עם סימון ברומיד אתידיום כדי לוודא את חוסר הימצאותן של RNase נראות.

טוהר פיזי

הטוהר הוא ≥95% כפי שדינו על ידי גל פוליאקרילאמיד עם צביעה בקואמוסי כחול.

הערה לשימוש

מונע ריבונוקלאז פעיל הטווח pH הרחב (pH5.5-9). השימוש הסטנדרטי ב-RT ובתסיסה vitro משתמש במונע ריבונוקלאז בקונCENTRATION סופי של 1u/µl.

הזמנה