Inibitore di Ribonucleasi, Inibitore di RNase 40U ul

inibitore ricombinante della Ribonuclease umana placentare, 40U/μl

sorgente

e. coli che esprime un clone ricombinante che porta il gene inibitore della ribonucleasi dalla placenta umana.

Concentrazione

40 u/μl.

definizione di unità

una unità è definita come la quantità di inibitore della ribonucleasi ricombinante necessaria per inibire l'attività di 5ng di ribonucleasi a del 50%.

L' attività è misurata inibendo l' idrolisi del monofosfato ciclico di citidina 23 da parte della ribonucleasi a.

buffer di stoccaggio

20 mm di hepes-koh ((ph7.6), 50 mm di kcl, 8 mm di dtt, 50% di glicerolo

Conservazione

conservare a -20°c

Controllo della qualità

assenza di endonucleasi
1 μg di DNA lambda viene incubato con 200 unità di inibitore della ribonucleasi per 16 ore a 37°C.
Dopo l'incubazione, il DNA lambda viene visualizzato intatto su un gel di agarosio macchiato di bromuro di etidio per verificare l'assenza di endonucleasi visibile.

assenza di nicchia
1 μg di pbr322 supercoiled di tipo i viene incubato con 200 unità di inibitore della ribonucleasi per 4 ore a 37°C.
dopo l'incubazione, il DNA supercolato viene visualizzato su un gel di agarosio macchiato di bromuro di etidio per verificare l'assenza di tagli o tagli visibili.

assenza di esonucleasi
1 μg di marcatori di lambda dna/hindiii viene incubato con 200 unità di inibitore della ribonucleasi per 16 ore a 37°c.
Dopo l'incubazione, i marcatori di lambda-DNA/hindiii vengono separati da un gel di agarosio all'1% e colorati con bromuro di etidio. I marcatori rimangono intatti come bande senza macchiare.

assenza di rnasi e rnasi latente
per verificare la presenza di attività rnasica, 1 ug di rna viene incubato con 200 unità di inibitore della ribonucleasi per 4 ore a 37°C.
Dopo l'incubazione, l'RNA viene visualizzato come banda intatta su un gel di agarosio macchiato di bromuro di etidio per verificare l'assenza di rnasi visibile.
Per verificare la presenza di attività latente della rnasi, 200 unità di inibitore della ribonucleasi vengono denaturate termicamente a 70°C per 15 minuti e incubate con 1 ug di rna per 4 ore a 37°C.
Dopo l'incubazione, l'RNA viene visualizzato come banda intatta su un gel di agarosio macchiato di bromuro di etidio per verificare l'assenza di rnasi visibile.

purezza fisica

la purezza è ≥ 95%, valutata con gel di sds-poliacrilammide con colorazione blu coomassie.

nota di utilizzo

La trascrizione standard rt e in vitro utilizza un inibitore della ribonucleasi a una concentrazione finale di 1 u/ ul.

ordine