Penghambat ribonuklease, penghambat rnase 40u ul

Penghambat ribonuklease plasenta manusia rekombinan, 40u/μl

sumber

strain e. coli yang mengekspresikan klon rekombinan yang membawa gen penghambat ribonuklease dari plasenta manusia.

konsentrasi

40 u/μl.

definisi unit

satu unit didefinisikan sebagai jumlah inhibitor ribonuklease rekombinan yang dibutuhkan untuk menghambat aktivitas 5ng ribonuklease a sebesar 50%.

Aktivitas diukur dengan penghambatan hidrolisis cytidine 23-cyclic monophosphate oleh ribonuclease a.

Buffer penyimpanan

20 mm hepes-koh ((ph7.6), 50 mm kcl, 8 mm dtt, 50% ((v/v) gliserol

penyimpanan

Simpan pada suhu -20°C

Kontrol kualitas

tidak adanya endonuklease
1μg lambda dna diinkubasi dengan 200 unit inhibitor ribonuklease selama 16 jam pada 37°c.
Setelah inkubasi, lambda DNA divisualisasikan utuh pada gel agarosa yang diwarnai dengan ethidium bromide untuk memverifikasi tidak adanya endonuklease yang terlihat.

Tidak adanya nikase
1μg pbr322 tipe i supercoiled diinkubasi dengan 200 unit inhibitor ribonuklease selama 4 jam pada 37°c.
Setelah inkubasi, DNA supercoiled divisualisasikan pada gel agarose yang diwarnai dengan ethidium bromide untuk memverifikasi tidak adanya potongan atau potongan yang terlihat.

tidak adanya eksonukleasa
1 μg dari lambda dna/hindiii marker diinkubasi dengan 200 unit inhibitor ribonuklease selama 16 jam pada 37°c.
Setelah inkubasi, penanda lambda DNA/hindiii dipisahkan dengan 1% agarose gel dan diwarnai dengan ethidium bromide. penanda tetap utuh sebagai pita tanpa mencuci.

Tidak adanya rnase dan rnase laten
Untuk menguji keberadaan aktivitas rnase, 1 ug rna diinkubasi dengan 200 unit inhibitor ribonuklease selama 4 jam pada 37°c.
Setelah inkubasi, RNA divisualisasikan sebagai pita utuh pada gel agarosa yang diwarnai dengan ethidium bromide untuk memverifikasi tidak adanya rnase yang terlihat.
Untuk menguji keberadaan aktivitas rnase laten, 200 unit inhibitor ribonuklease didenaturasi panas pada 70°c selama 15 menit dan diinkubasi dengan 1 ug rna selama 4 jam pada 37°c.
Setelah inkubasi, RNA divisualisasikan sebagai pita utuh pada gel agarosa yang diwarnai dengan ethidium bromide untuk memverifikasi tidak adanya rnase yang terlihat.

kemurnian fisik

kemurnian ≥ 95%, yang dinilai dengan sds-polyacrylamide gel dengan pewarnaan biru coomassie.

catatan penggunaan

Inhibitor ribonuklease aktif pada rentang pH yang luas (ph5. 5-9). rt standar dan transkripsi in vitro menggunakan inhibitor ribonuklease pada konsentrasi akhir 1 u/ ul.

Perintah