poli-a-polimeráz a következő generációs szekvenálási (ngs) készítményekben

poli-a-polimeráz(PAP) egy kulcsfontosságú enzimatikus tevékenység, amely felelős a poli-A farok hozzáadásáért az RNA molekulák 3’ végéhez. Ez a tevékenység jelentős szerepet játszik az RNA általános stabilitásában, szállításában és fordításában. Az NGS keretein belül azonban a PAP lehetővé teszi az A oligo hozzáadását az RNA mintákhoz a szekvenálás előtt, így magas minőségű adatok nyerhetők különböző RNA forrásokból.

A Poli A Farok Hozzáadásának Jelentősége

Számos előny kapcsolódik a poli A farok mRNS-hez való beépítéséhez. Először is, az A farok segít az RNA molekulák stabilitásának fokozásában ribonukleáz aktivitással szemben exonukleázok által. Másodszor, a poli A farok szerepet játszik a fordítási iniciálásban az mRNS-hez való riboszóma kötődés elősegítése révén. Az NGS előkészítések esetében a poli A farokkal ellátott mRNS könnyen felhasználható a célzottabb génexpressziós elemzéshez, valamint a transzkripciós variációkhoz, mivel ezek kifejezetten gazdagíthatók.

NGS Mintaelőkészítés

Az NGS munkafolyamatok magukban foglalják az RNA minták előkészítését, amely a következő lépéseket tartalmazza: reverz transzkripció, cDNA konstrukció és amplifikáció. Szintén gyakori, hogy Poly A polimerázt adnak hozzá a cDNA szintézis során, hogy poly-A farok kerüljön a végső cDNA molekulákba. Ez a módosítás kritikus a könyvtár amplifikációjához és szekvenálásához, mivel növeli a könyvtárak előkészítésében részt vevő lépések hatékonyságát.

Alkalmazások RNA-Seq-ben

A PAP szintén nagyon hasznos az RNA szekvenálás (RNA-Seq) alkalmazásokban, mivel lehetővé teszi a poly A-farkú mRNS hatékonyabb dúsítását. Ez segít egy tisztább transzkriptom szintű képet kapni a vizsgált organizmusról. Így az ilyen fejlesztés segíthet a differenciálisan expresszált gének, alternatív splicing események vagy akár nem kódoló RNS-ek meghatározásában. Továbbá, a PAP NGS előkészítésekbe való beillesztése ígéretesebb adatok megszerzését teszi lehetővé.

A PAP hozzáadása az NGS előkészítésekhez nagymértékben javíthatja a szekvenálási adatok minőségét és pontosságát. Ami még fontosabb, ahogy a kutatás tovább halad, a PAP jelentősége a tudósok számára a transzkriptom vizsgálatában továbbra is kiemelkedő marad.