रिबोन्यूक्लेएज़ अवरोधक, आरएनएज़ अवरोधक 40u

मानव प्लेसेंटा रिबोन्यूक्लेएज़ अवरोधक, 40 यू/μl

स्रोत

ई. कोलाई स्ट्रेन जो मानव प्लेसेंटा से रिबोन्यूक्लेएज़ अवरोधक जीन ले जाने वाले एक पुनर्मिलन क्लोन को व्यक्त करता है।

एकाग्रता

40 यू/एमएल

इकाई की परिभाषा

एक इकाई को रिकॉम्बिनेंट रिबोन्यूक्लेएज़ अवरोधक की मात्रा के रूप में परिभाषित किया गया है जो रिबोन्यूक्लेएज़ ए के 5ng की गतिविधि को 50% तक बाधित करता है।

गतिविधि को राइबोन्यूक्लेज़ ए द्वारा साइटीडिन 23-साइक्लिक मोनोफोस्फेट के हाइड्रोलिसिस के अवरोध द्वारा मापा जाता है।

भंडारण बफर

20 मिमी हेप्स-कोह ((ph7.6), 50 मिमी केसीएल, 8 मिमी डीटीटी, 50% ग्लिसरिन

भंडारण

-20°सी पर रखा जाए

गुणवत्ता नियंत्रण

अंतोन्यूक्लेज़ की अनुपस्थिति
लैंब्डा डीएनए का 1μg 200 इकाइयों के रिबोन्यूक्लेएज़ अवरोधक के साथ 37°C पर 16 घंटे तक बुदबुदाया जाता है।
प्रजनन के बाद, लैंब्डा डीएनए को एथिडियम ब्रोमाइड से सना एगरोज जेल पर बरकरार के रूप में देखा जाता है ताकि दृश्यमान एंडोन्यूक्लेज़ की अनुपस्थिति की पुष्टि की जा सके।

निकेस की अनुपस्थिति
प्रकार I सुपरकोइल pbr322 के 1μg को 200 इकाइयों के रिबोन्यूक्लेज़ अवरोधक के साथ 37°C पर 4 घंटे तक बुदबुदाया जाता है।
प्रजनन के बाद, सुपरकोइल डीएनए को एथिडियम ब्रोमाइड से सना हुआ अगरोज जेल पर दृश्यमान रूप से प्रदर्शित किया जाता है ताकि यह सत्यापित किया जा सके कि कोई दृश्यमान निशान या कटौती नहीं है।

एक्सोन्यूक्लेज़ की अनुपस्थिति
लैंब्डा डीएनए/हिंदीआईआई मार्करों के 1μg को 200 इकाइयों के रिबोन्यूक्लेएज़ अवरोधक के साथ 37°सी पर 16 घंटे तक बुदबुदाया जाता है।
प्रजनन के बाद, लैम्बडा डीएनए/हिंदीआईआई मार्करों को 1% अगरोज जेल से अलग किया जाता है और एथिडियम ब्रोमाइड से रंग दिया जाता है। मार्कर बिना मैश किए बरकरार बैंड के रूप में रहते हैं।

र्नाज़ की अनुपस्थिति और लटकती र्नाज़
आरएनएएस गतिविधि की उपस्थिति के लिए परीक्षण करने के लिए, आरएनए के 1 यूजी को 200 इकाइयों के रिबोन्यूक्लेज़ अवरोधक के साथ 37 डिग्री सेल्सियस पर 4 घंटे के लिए बुदबुदाया जाता है।
इनक्यूबेशन के बाद, आरएनए को एथिडियम ब्रोमाइड से सना एगरोज जेल पर बरकरार बैंड के रूप में दृश्यमान आरएनएज़ की अनुपस्थिति की पुष्टि करने के लिए कल्पना की जाती है।
गुप्त आरएनएएस गतिविधि की उपस्थिति के लिए परीक्षण करने के लिए, रिबोन्यूक्लेएज़ अवरोधक के 200 यूनिट को 70°C पर 15 मिनट के लिए गर्मी-विनाश कर दिया जाता है और 37°C पर 1 यूजी आरएनए के साथ 4 घंटे के लिए इनक्यूबेट किया जाता है।
इनक्यूबेशन के बाद, आरएनए को एथिडियम ब्रोमाइड से सना एगरोज जेल पर बरकरार बैंड के रूप में दृश्यमान आरएनएज़ की अनुपस्थिति की पुष्टि करने के लिए कल्पना की जाती है।

शारीरिक शुद्धता

शुद्धता ≥ 95% है, जो कि कोमासी नीले रंग के साथ एसडीएस-पोलियाक्रिलामाइड जेल द्वारा आंका गया है।

उपयोग नोट

रिबोन्यूक्लेएज़ अवरोधक व्यापक पीएच सीमा (पीएच5.5-9) पर सक्रिय होता है। मानक आरटी और इन विट्रो ट्रांसक्रिप्शन में 1 यू/ यूएल की अंतिम एकाग्रता पर रिबोन्यूक्लेएज़ अवरोधक का उपयोग किया जाता है।

क्रम