आरएनएज निहितकर्ता, RNase निहितकर्ता 40U ul

पुनर्जीवित मानव प्लेसेंटा राइबोन्यूक्लेएस इंहिबिटर, 40U/μl

स्रोत

ए. कोलाइ वंश जो मानव शुदौत्र से राइबोन्यूक्लेएस इनहिबिटर जीन को बहर करने वाले एक रीकम्बिनेंट कローン को व्यक्त करता है।

एकाग्रता

40 U\/μl.

इकाई परिभाषा

एक इकाई को 5 नैनोग्राम राइबोन्यूक्लेएस ऐ की गतिविधि को 50% रोकने के लिए आवश्यक रीकम्बिनेंट राइबोन्यूक्लेएस इनहिबिटर की मात्रा के रूप में परिभाषित की जाती है।

गतिविधि को राइबोन्यूक्लेएस ऐ द्वारा साइटिडीन 2’3’-सायक्लिक मोनोफोस्फेट के हाइड्रोलिसिस की रोक के द्वारा मापा जाता है।

स्टोरेज बफर

20mM HEPES-KOH(PH7.6), 50mM KCl, 8mM DTT, 50%(v\/v) ग्लाइसरॉल

भंडारण

-20°C पर रखें

गुणवत्ता नियंत्रण

एंडोन्यूक्लेएस की अनुपस्थिति
1μg लैम्बडा DNA को 200 इकाइयों के रिबोन्यूक्लिएस इनहिबिटर के साथ 37°C पर 16 घंटे के लिए इंक्यूबेट किया जाता है।
इंक्यूबेशन के बाद, एथिडियम ब्रोमाइड-स्टेन्ड एगरोज गेल पर लैम्बडा DNA को पूर्णतः अचल के रूप में देखा जाता है ताकि विशिष्ट एंडोन्यूक्लिएस की अनुपस्थिति की पुष्टि की जा सके।

निक्सेज की अनुपस्थिति
1μg Type I सुपरकोइल्ड pBR322 को 200 इकाइयों के रिबोन्यूक्लिएस इनहिबिटर के साथ 37°C पर 4 घंटे के लिए इंक्यूबेट किया जाता है।
इंक्यूबेशन के बाद, सुपरकोइल्ड DNA को एथिडियम ब्रोमाइड-स्टेन्ड एगरोज गेल पर देखा जाता है ताकि दिखने वाले निकिंग या कटिंग की अनुपस्थिति की पुष्टि की जा सके।

एक्सोन्यूक्लिएस की अनुपस्थिति
1μg लैम्बडा DNA/HindIII मार्कर्स को 200 इकाइयों के रिबोन्यूक्लिएस इनहिबिटर के साथ 37°C पर 16 घंटे के लिए इंक्यूबेट किया जाता है।
इंक्यूबेशन के बाद, लैम्बडा DNA/HindIII मार्कर्स को 1% एगरोज गेल द्वारा अलग किया जाता है और एथिडियम ब्रोमाइड से रंग दिया जाता है। मार्कर्स पूर्णतः बैंडों के रूप में रहते हैं बिना किसी स्मियरिंग के।

RNase और छिपी हुई RNase की अनुपस्थिति
RNase गतिविधि की उपस्थिति का परीक्षण करने के लिए, 1ug RNA को 200 इकाइयों के रिबोन्यूक्लिएस इनहिबिटर के साथ 37°C पर 4 घंटे के लिए इंक्यूबेट किया जाता है।
इंक्यूबेशन के बाद, RNA को एथिडियम ब्रोमाइड स्टेन्ड एगरोस जेल पर एक पूर्ण बैंड के रूप में देखा जाता है ताकि विशिष्ट RNase की अनुपस्थिति की पुष्टि की जा सके।
गुप्त RNase सक्रियता की उपस्थिति का परीक्षण करने के लिए, 200 इकाइयाँ Ribonuclease Inhibitor को 70°C पर 15 मिनट के लिए गर्मी से विकृत किया जाता है और 1 µg RNA के साथ 37°C पर 4 घंटे के लिए इंक्यूबेट किया जाता है।
इंक्यूबेशन के बाद, RNA को एथिडियम ब्रोमाइड स्टेन्ड एगरोस जेल पर एक पूर्ण बैंड के रूप में देखा जाता है ताकि विशिष्ट RNase की अनुपस्थिति की पुष्टि की जा सके।

भौतिक शुद्धता

SDS-पॉलीएक्रिलामाइड जेल के आधार पर शुद्धता ≥95% है, Coomassie blue स्टेनिंग के द्वारा निर्धारित।

उपयोग का नोट

Ribonuclease Inhibitor चौड़े pH रेंज (pH5.5-9) में सक्रिय है। मानक RT और in vitro प्रवर्तन में Ribonuclease Inhibitor का अंतिम सांद्रण 1u/µl होता है।

आदेश