अगली पीढ़ी के अनुक्रमण (एनजीएस) तैयारियों में पॉली ए पॉलीमेरेज़

पॉली ए पॉलीमेरेज़(PAP) एक प्रमुख एंजाइमेटिक क्रिया है जो RNA अणुओं के 3’ अंत में पॉली-ए पूंछ जोड़ने के लिए जिम्मेदार है। इस गतिविधि का RNA की समग्र स्थिरता, परिवहन और अनुवाद में महत्वपूर्ण भूमिका है। हालांकि, NGS के ढांचे के भीतर, PAP RNA नमूनों में अनुक्रमण से पहले A ओलिगो जोड़ने की अनुमति देता है ताकि विभिन्न RNA स्रोतों से उच्च गुणवत्ता वाले डेटा प्राप्त किया जा सके।

पॉली ए टेलिंग जोड़ने का महत्व

mRNA में पॉली A पूंछ के समावेश के साथ कई लाभ जुड़े हुए हैं। सबसे पहले, A पूंछ RNA अणुओं की स्थिरता को राइबोन्यूक्लियस गतिविधि के खिलाफ बढ़ाने में मदद करती है। दूसरे, पॉली A पूंछ अनुवाद प्रारंभ में भूमिका निभाती है, जो mRNA पर राइबोसोम के जुड़ाव को बढ़ावा देती है। NGS तैयारियों के मामले में, पॉली A-टेल्ड mRNA को विशेष रूप से समृद्ध किया जा सकता है, जिससे अधिक केंद्रित जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण और ट्रांसक्रिप्ट भिन्नताओं के लिए आसानी से उपयोग किया जा सकता है।

 NGS नमूना तैयारी

NGS कार्यप्रवाहों में RNA नमूनों की तैयारी शामिल होती है जिसमें निम्नलिखित चरण शामिल हैं: रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन, cDNA निर्माण, और एम्प्लीफिकेशन। cDNA संश्लेषण के दौरान अंतिम cDNA अणुओं में एक पॉली-ए टेल शामिल करने के लिए पॉली ए पॉलीमरेज़ जोड़ना भी सामान्य है। यह संशोधन पुस्तकालय एम्प्लीफिकेशन और अनुक्रमण के लिए महत्वपूर्ण है क्योंकि यह पुस्तकालयों की तैयारी में शामिल चरणों की दक्षता को बढ़ाता है।

RNA-Seq में अनुप्रयोग

PAP RNA अनुक्रमण (RNA-Seq) अनुप्रयोगों में भी बहुत उपयोगी है क्योंकि यह पॉली ए-टेल वाले mRNA के लिए अधिक कुशल समृद्धि की अनुमति देता है। यह अध्ययन के अधीन जीव के ट्रांसक्रिप्टोम-स्तरीय चित्र को स्पष्ट रूप से कैप्चर करने में मदद करता है। इस प्रकार, इस प्रकार का संवर्धन विभिन्न रूप से व्यक्त जीन, वैकल्पिक स्प्लाइसिंग घटनाओं, या यहां तक कि गैर-कोडिंग RNA को निर्धारित करने में मदद कर सकता है। इसके अलावा, NGS तैयारियों में PAP को शामिल करने से अधिक आशाजनक डेटा प्राप्त करने में सक्षम होता है।

NGS तैयारियों में PAP जोड़ने से अनुक्रमण डेटा की गुणवत्ता और सटीकता में काफी सुधार हो सकता है। और भी महत्वपूर्ण बात यह है कि जैसे-जैसे अनुसंधान आगे बढ़ता है, वैज्ञानिकों को ट्रांसक्रिप्टोम की जांच करने की अनुमति देने के लिए PAP का महत्व प्रमुख बना रहेगा।