उच्च शुद्ध रिबोन्यूक्लेएज़ अवरोधक समाधान - आरएनएज़ अवरोधक 40U/μl, सीडीएनए संश्लेषण और आणविक जीव विज्ञान अनुप्रयोगों में आरएनए सुरक्षा के लिए इष्टतम

उत्पाद विवरण

हमारे उच्च शुद्ध राइबोन्यूक्लियेज अवरोधक समाधान का परिचय, एक प्रीमियम गुणवत्ता वाला अभिकर्ता जिसमें आरएनएएस अवरोधक अत्यधिक संकेंद्रित 40 यूनिट्स/μl पर है। यह समाधान विशेष रूप से विभिन्न आणविक जीवविज्ञान प्रक्रियाओं में RNA हैंडलिंग के दौरान राइबोन्यूक्लियेज के खिलाफ अधिकतम सुरक्षा प्रदान करने के लिए इंजीनियर किया गया है।

मुख्य विशेषताएँ

• अतिशय शुद्धता: राइबोन्यूक्लिएस इनहिबिटर पुनर्जीवित रूप से उत्पन्न किया गया है और शुद्धता की गारंटी देने के लिए कठोर रूप से शुद्ध किया गया है, जिससे आपके प्रयोगों में कोई बाधा न हो।

• अति-सांद्र सूत्र: 40U/μl सांद्रता पर उपलब्ध, यह इनहिबिटर मांग के अनुप्रयोगों में प्रभावी रूप से उपयोग किया जा सकता है, जहाँ भलीभांति RNase की छोटी मात्रा परिणामों को ख़राब कर सकती है।

• व्यापक क्रियाशीलता: इनहिबिटर RNases A, B, C और अन्य अंतः और बाह्य राइबोन्यूक्लिएस को प्रभावी रूप से निष्क्रिय करता है, आपके RNA नमूनों को विघटन से बचाता है।

• स्थिर और सक्रिय: तापमान और pH प्रतिबंधों की श्रृंखला में स्थिरता के लिए सूचित किया गया है, इनहिबिटर स्टोरेज़ के दौरान और विभिन्न प्रयोगशाली प्रोटोकॉल के दौरान सक्रिय रहता है।

• संगतता: स्वचालित प्रणालियों और हाथ से तैयार की गई प्रतिक्रियाओं के साथ उपयोग के लिए आदर्श है, यह cDNA संश्लेषण और न्यूक्लिक अम नियंत्रण तकनीकों में सामान्यतः उपयोग किए जाने वाले बफर्स और एंजाइम्स के साथ पूरी तरह से संगत है।

अनुप्रयोग

• cDNA संश्लेषण: प्रतिगामी प्रतिलिपि प्रतिक्रियाओं के दौरान RNase प्रदूषण से बचाने के लिए आवश्यक है, इससे संश्लिष्ट cDNA के उत्पादन और अभिनतता में सुधार होता है।

• RNA अलग करना और शुद्ध करना: RNA अलग करने और शुद्ध करने के पहले और बाद में RNA की अभिनतता बनाए रखने के लिए RNA अलग करने के किट और शुद्धिकरण कार्यक्रम में जीवंत घटक है।

• उत्तरी ब्लाटिंग: मेम्ब्रेन पर RNA को खराब करने वाली RNase गतिविधि को रोककर उच्च-गुणवत्ता वाले RNA स्थानांतरण और हाइब्रिडाइज़ेशन की गारंटी करता है।

• qPCR और RT-qPCR: मात्रात्मक PCR और प्रतिगामी प्रतिलिपि मात्रात्मक PCR परीक्षणों में RNA टेम्पलेट को सुरक्षित करता है, संवेदनशीलता और विशिष्टता में वृद्धि करता है।

• आरएनए-प्रोटीन अंतःक्रिया का अध्ययन: सह-अमुक्तिकरण (RIP) और अन्य आरएनए-प्रोटीन अंतःक्रिया प्रयोगों के दौरान आरएनए अणुओं को संरक्षित करता है।

स्रोत

ए. कोलाइ वंश जो मानव शुदौत्र से राइबोन्यूक्लेएस इनहिबिटर जीन को बहर करने वाले एक रीकम्बिनेंट कローン को व्यक्त करता है।

एकाग्रता

40 U\/μl.

इकाई परिभाषा

एक इकाई को 5 नैनोग्राम राइबोन्यूक्लेएस ऐ की गतिविधि को 50% रोकने के लिए आवश्यक रीकम्बिनेंट राइबोन्यूक्लेएस इनहिबिटर की मात्रा के रूप में परिभाषित की जाती है।

गतिविधि को राइबोन्यूक्लेएस ऐ द्वारा साइटिडीन 2’3’-सायक्लिक मोनोफोस्फेट के हाइड्रोलिसिस की रोक के द्वारा मापा जाता है।

स्टोरेज बफर

20mM HEPES-KOH(PH7.6), 50mM KCl, 8mM DTT, 50%(v\/v) ग्लाइसरॉल

भंडारण

-20°C पर रखें

गुणवत्ता नियंत्रण

एंडोन्यूक्लेएस की अनुपस्थिति

1μg लैम्बडा DNA को 200 इकाइयों के रिबोन्यूक्लिएस इनहिबिटर के साथ 37°C पर 16 घंटे के लिए इंक्यूबेट किया जाता है।

इंक्यूबेशन के बाद, एथिडियम ब्रोमाइड-स्टेन्ड एगरोज गेल पर लैम्बडा DNA को पूर्णतः अचल के रूप में देखा जाता है ताकि विशिष्ट एंडोन्यूक्लिएस की अनुपस्थिति की पुष्टि की जा सके।

निक्सेज की अनुपस्थिति

1μg Type I सुपरकोइल्ड pBR322 को 200 इकाइयों के रिबोन्यूक्लिएस इनहिबिटर के साथ 37°C पर 4 घंटे के लिए इंक्यूबेट किया जाता है।

इंक्यूबेशन के बाद, सुपरकोइल्ड DNA को एथिडियम ब्रोमाइड-स्टेन्ड एगरोज गेल पर देखा जाता है ताकि दिखने वाले निकिंग या कटिंग की अनुपस्थिति की पुष्टि की जा सके।

एक्सोन्यूक्लिएस की अनुपस्थिति

1μg लैम्बडा DNA/HindIII मार्कर्स को 200 इकाइयों के रिबोन्यूक्लिएस इनहिबिटर के साथ 37°C पर 16 घंटे के लिए इंक्यूबेट किया जाता है।

इंक्यूबेशन के बाद, लैम्बडा DNA/HindIII मार्कर्स को 1% एगरोज गेल द्वारा अलग किया जाता है और एथिडियम ब्रोमाइड से रंग दिया जाता है। मार्कर्स पूर्णतः बैंडों के रूप में रहते हैं बिना किसी स्मियरिंग के।

RNase और छिपी हुई RNase की अनुपस्थिति

RNase गतिविधि की उपस्थिति का परीक्षण करने के लिए, 1ug RNA को 200 इकाइयों के रिबोन्यूक्लिएस इनहिबिटर के साथ 37°C पर 4 घंटे के लिए इंक्यूबेट किया जाता है।

इंक्यूबेशन के बाद, RNA को एथिडियम ब्रोमाइड स्टेन्ड एगरोस जेल पर एक पूर्ण बैंड के रूप में देखा जाता है ताकि विशिष्ट RNase की अनुपस्थिति की पुष्टि की जा सके।

गुप्त RNase सक्रियता की उपस्थिति का परीक्षण करने के लिए, 200 इकाइयाँ Ribonuclease Inhibitor को 70°C पर 15 मिनट के लिए गर्मी से विकृत किया जाता है और 1 µg RNA के साथ 37°C पर 4 घंटे के लिए इंक्यूबेट किया जाता है।

इंक्यूबेशन के बाद, RNA को एथिडियम ब्रोमाइड स्टेन्ड एगरोस जेल पर एक पूर्ण बैंड के रूप में देखा जाता है ताकि विशिष्ट RNase की अनुपस्थिति की पुष्टि की जा सके।

भौतिक शुद्धता

SDS-पॉलीएक्रिलामाइड जेल के आधार पर शुद्धता ≥95% है, Coomassie blue स्टेनिंग के द्वारा निर्धारित।

उपयोग का नोट

Ribonuclease Inhibitor चौड़े pH रेंज (pH5.5-9) में सक्रिय है। मानक RT और in vitro प्रवर्तन में Ribonuclease Inhibitor का अंतिम सांद्रण 1u/µl होता है।