An Ról a Chaitheann M-Mlv Athuairscríobh In CDNA Synthesis

m-mlv reverse transcriptase is é sin eanghniomh idirbhriathar i gceolaithe beatha a chatalaíonn an t-éagsúlacht RNA chuig DNA chothrom (cDNA) agus a thóghtar ó víreas Moloney Murine Leukemia. Is eanghniomh reachta is mian le clónáil agus seiceáil na ngéin agus bíonn úsáid taitneamhach déanta de, i dtionscnaimh staidéar eanghníomh. Tugann an tuiscint ar chur i bhfeidhm an eanghniomh seo agus conas a úsáidear léargas ar an leibhéal reatha de phrácasaithe biotéicneolaíochta.

Feabhsuithe i gCeolaithe Beatha

Is é neamhthomhas is gairid úsáide M-MLV Reverse Transcriptase i réimse staidéar eangachta gineálacha. Déantar é go minic trí thiomraidh chlisíneach den mRNA, a bhfuil an mRNA seo ar fheabhsú le cDNA, cinntiú faoin ngleic idir léibhéal eangachta na ngéin trí PhCR uafásach (qPCR). Mar sin féin, tá an tiomhaireacht seo de dhíth sa chlóinítheacht a chuireann cearnóg cDNA den ghiobal géiní mar thoradh ar phlasmaid véictéar don fhorbairt i bactaireach nó i gcinn éagsúla eile. Feictear a úsáid chomh maith san úsáid de chóras cDNA, atá cruthaithe ón gcDNA a chuirtear isteach agus a thugann taifead ar an gceathrúchán briondálaigh.

Buntáistí agus Caighdeán

Tá cúisíochtaí ag M-MLV Reverse Transcriptase, lena n-áiríte an gcuimhneamh go mbeidh ard-easpa agus fíorú ar fáil aige, a bhfuil ráidhte i gcás síntéise molad cDNA faoi. Fós, tá roinnt briste leis an eangach seo, lena n-áiríte go bhfuil meas ar an gcineál struchtúr atá ann i dtéama RNA a chur in éadromacht ar an ngné seo den eangach. Is féidir le na factóirí seo cainteideal síntéise cDNA a chinntiú go neamhshuimiúil ó thaobh feidhmíochtai agus ceannróla de. Ach is gá do na codanna reacaire a chothú mar thoradh ar na comhlachtaí seo chun fiúint na n-aitheantas a fheabhsú.

Téicní agus Prótacaí

Chun an M-MLV Trascríobhaire Inbhéartach a úsáid go héifeachtach, ní mór aird speisialta a thabhairt do fhachtóirí cosúil le rogha na bpríomhoibrithe, teocht an imoibrithe agus comhoibriú na bholgáin i measc nithe eile. Ní mór na príomhoibrithe a thógáil ar bhealach nach bhfuil lúbanna gruaige ann agus go gcuirtear an ceangail leis an mblagán RNA uasmhéid. Meastar go bhfuil 42°C, a bhfuil sé coitianta do na himoibrithe sin, mar teocht oiriúnach do imoibriú einsím, ionas go mbeidh gníomhaíocht agus cobhsaíocht na heinsímí uasmhéid. Ar an gcoinne, d'fhéadfadh úsáid substaintí eile cosúil le Inniúir Rnase a choinneáil ar an RNA a d'fhéadfadh a bheith scriosta le linn an imoibrithe.

Amachbhlianta Romhat

Cuirfidh feabhsú níos fearr againn ar bhiotéicniógach chun cúrsaí mar a dhéanfaidh an M-MLV Reverse Transcriptase fosta a chur i gcás. Tá straitéisí nua ar fáil inniu a chomhlíonann brath ar na meaisín atá modhnaithe ag inžinéirí le haghaidh próiseáid is gairid a chruthaíonn siad. Mar aon leis sin, is féidir an teicneolaíocht seo a chasadh le seiceáil chuige seo a dtugtar 'next-generation sequencing' a d'fhágfar roinnt nua-imeartha ar pháipéar staidéir geneachta agus comhéadan ábhar.

Chun an deireadh a thabhairt, bíonn an M-MLV Reverse Transcriptase mar phríomhshuim sa rannpháirtíocht biolóige mólfheorainne ar son an méid is tábhachtach a bhfuil aici don chur isteach den cDNA i gcélleanna. Cionn go bhfuil dúshlán ann go cinnte, tá éagsúlacht ar fhorbairt teicneolaíochtaí nua a chur béim ar feabhsuithe an M-MLV reverse transcriptase, ag dul i ngleic le tuiscint níos fearr ar chóras codach genaigh agus a mheastachán.