cosclóir ribonuclease, cosclóir rnase 40u

cosclóir ribonuclease placenta daonna athchomhcheangailte, 40u/μl

foinse

strain e. coli a léiríonn clón athchomhcheangailte a bhfuil géin coscadóra ribonuclease aige ó phlácenta an duine.

tiúchan

40 u/μl.

sainmhíniú aonad

sainmhínítear aonad amháin mar an méid coscadóra ribonuclease athchomhordaithe is gá chun gníomhaíocht 5ng de ribonuclease a a chosc 50%.

Déantar an ghníomhaíocht a thomhas trí thionólise monophosphate cytidine 23-ciciceach a chosc ag ribonuclease a.

buffer stórála

20mm hepes-koh ((ph7.6), 50mm kcl, 8mm dtt, 50% ((v/v) glícéaról

stóráil

stóráil ag -20°c

rialú cáilíochta

neamh-ionadú endonuclease
Déantar 1μg d'ADN lambda a chur i ngréasán le 200 aonad de choscóir ribonuclease ar feadh 16 uair an chloig ag 37°c.
tar éis an inbhuála, déantar an DNA lambda a shamhlú mar shláintiúil ar ghéile agaróis atá clúdaithe le brómíd éidiam chun fíorú a dhéanamh ar easpa endonuclease infheicthe.

gan nicas
Déantar 1μg de pbr322 cineál i atá ró-chruaite a inchuibú le 200 aonad de choscóir ribonuclease ar feadh 4 uair ag 37°c.
tar éis an inbhuála, déantar an DNA atá ró-chruinnithe a shamhlú ar ghéile agaróis atá stainithe le brómíd éidiam chun a fhíorú nach bhfuil aon scrios nó gearradh le feiceáil ann.

gan exonuclease
Déantar 1μg de mharcóirí lambda dna/hindiii a chur i ngréasán le 200 aonad coscadóir ribonuclease ar feadh 16 uair an chloig ag 37°c.
tar éis an inbhuithe, scarfar marcóirí lambda dna/hindiii le 1% gel agarose agus déantar iad a dhroit le bróméad éidiam. Fanann marcóirí mar bannaí sláintiúla gan a smúchadh.

gan rnase agus rnase dorcha
Chun tástáil a dhéanamh ar ghníomhaíocht rnase, déantar 1 ug rna a inchuibú le 200 aonad coscóir ribonuclease ar feadh 4 uair ag 37°c.
Tar éis an inbhuitín, déantar an RNA a shamhlú mar banna sláintiúil ar ghéile agaróis atá stainithe le brómíd éidiam chun fíorú a dhéanamh ar easpa rnase infheicthe.
Chun tástáil a dhéanamh ar ghníomhaíocht rnase latent, déantar 200units de thionlacan ribonuclease a dhenachtú le teas ag 70°c ar feadh 15 nóiméad agus a inchuibú le 1ug de rna ar feadh 4 uair an chloig ag 37°c.
Tar éis an inbhuitín, déantar an RNA a shamhlú mar banna sláintiúil ar ghéile agaróis atá stainithe le brómíd éidiam chun fíorú a dhéanamh ar easpa rnase infheicthe.

íonacht fhisiciúil

Tá an íonacht ≥95% de réir géile sds-pholaicrilamide le datú gorm coomassie.

nóta úsáide

Tá coscóir ribonuclease gníomhach thar raon leathan ph (ph5. 5-9). úsáideann an rt caighdeánach agus an t- aistritheoireacht in vitro coscóir ribonuclease ag tiúchan deiridh de 1u/ ul.

ordú