Poly a polymerase i dtáirgí leaganacha chéad ghlúin eile (ngs)

poliamhairse(PAP) is gníomh einsímach clé atá freagrach as an gcuimsiú ar an poly-A tail chuig deireadh 3’ na móilíní RNA. Tá ról suntasach ag an ngníomh seo i gcoitinne cobhsaíocht, iompar, agus aistriú RNA. Laistigh de chreat NGS, áfach, ligeann PAP don A oligo a chur leis na samplaí RNA roimh an tsraith ionas go bhféadfar sonraí ardchaighdeáin ó fhoinsí RNA éagsúla a fháil.

Tábhacht na Cuimsithe Poly A Tailing

Tá go leor buntáistí ag baint le cuimsiú an poly A tail chuig mRNA. Ar dtús, cuireann A tail le feabhsú cobhsaíochta na móilíní RNA i gcoinne gníomhaíochta ribonuclease trí exonucleases. Ar an dara dul síos, tá ról ag an poly A tail maidir le tús a chur le haistriú trí chur chun cinn ceangail ribosome leis an mRNA. I gcás ullmhúcháin NGS, is féidir mRNA le poly A tail a úsáid go héasca le haghaidh anailís níos dírithe ar ghin a chur in oiriúnacht le hathruithe trascríobh mar is féidir iad a shaibhriú go sonrach.

Ullmhúchán Sampla NGS

Cuimsíonn na hoibreacha NGS ullmhúchán na samplaí RNA a bhaineann leis na céimeanna seo a leanas: trascríobh in aghaidh, tógáil CDNA, agus neartú. Is coitianta freisin Poly A polymerase a chur leis le linn sintéis CDNA chun eangach poly-A a chur san áireamh i na móilíní cDNA deiridh. Tá an modhnú seo ríthábhachtach do neartú leabharlainne agus do shraith, ós rud é go méadaíonn sé éifeachtúlacht na gcéimeanna a bhaineann le hullmhúchán na leabharlainne.

Feidhmchláir i RNA-Seq

Tá PAP an-úsáideach freisin i bhfeidhmchláir shraith RNA (RNA-Seq) mar go gceadaíonn sé saibhriú níos éifeachtaí do mRNA le eangach poly A. Cuireann sé seo le pictiúr níos soiléire de leibhéal trascríobh an orgánaigh atá á staidéar. Mar sin, is féidir le feabhsúchán den sórt sin cabhrú le géinte a léirítear go difriúil, imeachtaí splicing malartacha, nó fiú RNA nach gcuirtear cód orthu. Thairis sin, cuireann PAP i hullmhúcháin NGS ar chumas sonraí níos geallta a fháil.

Is féidir le PAP a chur le hullmhúcháin NGS an cáilíocht agus an cruinneas atá ag na sonraí séquencing a fheabhsú go mór. Cad é níos tábhachtaí, de réir mar a leanann an taighde ar aghaidh, beidh tábhacht PAP chun ligean do eolaithe an trascríoptóm a fhiosrú fós mór.