Inhibiteur de la ribonucléase, inhibiteur de la rnase

Inhibiteur de la ribonucléase du placenta humain recombinant, 40 u/μl

source

souche d'e. coli exprimant un clone recombinant qui porte le gène inhibiteur de la ribonucléase du placenta humain.

concentration

40 unités/μl.

définition de l'unité

une unité est définie comme la quantité d'inhibiteur de la ribonucléase recombinante nécessaire pour inhiber l'activité de 5 ng de ribonucléase a de 50%.

L'activité est mesurée par inhibition de l'hydrolyse du cytidine 23-monophosphate cyclique par la ribonucléase a.

tampon de stockage

20 mm d'hépes-koh ((ph7.6), 50 mm de kcl, 8 mm de dtt, 50% ((v/v) de glycérol

stockage

conserver à -20°C

contrôle de la qualité

absence d' endonucléase
1 μg d'ADN lambda est incubé avec 200 unités d'inhibiteur de la ribonucléase pendant 16 heures à 37°C.
Après l'incubation, l'ADN lambda est visualisé intact sur un gel d'agarose teinté de bromure d'éthidium pour vérifier l'absence d'endonucléase visible.

absence de nickase
1 μg de pbr322 de type i en supercoil est incubé pendant 4 heures à 37°C avec 200 unités d'inhibiteur de la ribonucléase.
Après l'incubation, l'ADN en superenroulement est visualisé sur un gel d'agarose teint de bromure d'éthidium pour vérifier l'absence de coupures ou de coupures visibles.

absence d'exonucléase
1 μg de marqueurs d'ADN lambda/hindiii est incubé pendant 16 heures à 37°C avec 200 unités d'inhibiteur de la ribonucléase.
Après l'incubation, les marqueurs d'ADN lambda/hindiii sont séparés par un gel d'agarose à 1% et colorés avec du bromure d'éthidium. Les marqueurs restent intacts sans être frottés.

absence de rnase et rnase latente
Pour détecter la présence d'une activité de la rnase, 1 uG d'ARN est incubé pendant 4 heures à 37°C avec 200 unités d'inhibiteur de la ribonucléase.
Après l'incubation, l'ARN est visualisé sous forme de bande intacte sur un gel d'agarose teinté de bromure d'éthidium pour vérifier l'absence de rnase visible.
Pour détecter la présence d'une activité rnase latente, 200 unités d'inhibiteur de la ribonucléase sont dénaturées à 70°C pendant 15 minutes et incubées avec 1ug d'ARN pendant 4 heures à 37°C.
Après l'incubation, l'ARN est visualisé sous forme de bande intacte sur un gel d'agarose teinté de bromure d'éthidium pour vérifier l'absence de rnase visible.

pureté physique

la pureté est ≥ 95%, selon le gel de polyacrylamide sds avec teinture bleue coomassie.

note d'utilisation

Le test de transcription standard et in vitro utilise un inhibiteur de la ribonucléase à une concentration finale de 1 u/ ul.

ordre