Inhibiteur de Ribonucléase, Inhibiteur RNase 40U μl

inhibiteur de ribonucléase humaine recombinante du placenta, 40U/μl

source

Souche d'E. coli exprimant un clone recombinant porteur du gène de l'inhibiteur de ribonucléase du placenta humain.

Concentration

40 U/μl.

Définition de l'unité

Une unité est définie comme la quantité d'inhibiteur de ribonucléase recombinant nécessaire pour inhiber l'activité de 5 ng de ribonucléase A de 50 %.

L'activité est mesurée par l'inhibition de l'hydrolyse du cytidine 2’3’-cyclic monophosphate par la ribonucléase A.

Tampon de stockage

20mM HEPES-KOH (pH 7,6), 50mM KCl, 8mM DTT, 50% (v/v) glycérine

Stockage

Conserver à -20°C

Contrôle Qualité

Absence d'endonucléase
1 μg d'ADN Lambda est incubé avec 200 unités d'inhibiteur de ribonucléase pendant 16 heures à 37°C.
Après incubation, l'ADN Lambda est visualisé intact sur un gel d'agarose coloré au bromure d'éthidium pour vérifier l'absence d'endonucléase visible.

Absence de nickase
1 μg de pBR322 superenroulé de type I est incubé avec 200 unités d'inhibiteur de ribonucléase pendant 4 heures à 37°C.
Après incubation, l'ADN superenroulé est visualisé sur un gel d'agarose coloré au bromure d'éthidium pour vérifier l'absence de coupures ou de nicks visibles.

Absence d'exonucléase
1 μg de marqueurs Lambda DNA/HindIII est incubé avec 200 unités d'inhibiteur de ribonucléase pendant 16 heures à 37°C.
Après incubation, les marqueurs Lambda DNA/HindIII sont séparés par un gel d'agarose à 1% et colorés au bromure d'éthidium. Les marqueurs restent en bandes intactes sans étalage.

Absence de RNase et de RNase latente
Pour tester la présence d'une activité RNase, 1 µg d'ARN est incubé avec 200 unités d'inhibiteur de ribonucléase pendant 4 heures à 37 °C.
Après l'incubation, l'ARN est visualisé comme une bande intacte sur un gel d'agarose coloré au bromure d'éthidium pour vérifier l'absence de RNase visible.
Pour tester la présence d'une activité RNase latente, 200 unités d'inhibiteur de ribonucléase sont dénaturées par la chaleur à 70 °C pendant 15 minutes et incubées avec 1 µg d'ARN pendant 4 heures à 37 °C.
Après l'incubation, l'ARN est visualisé comme une bande intacte sur un gel d'agarose coloré au bromure d'éthidium pour vérifier l'absence de RNase visible.

Pureté Physique

La pureté est ≥95 % selon le gel d'acrylamide SDS avec coloration au bleu de Coomassie.

Note d'Utilisation

L'inhibiteur de ribonucléase est actif dans une large gamme de pH (pH 5,5-9). L'utilisation standard en RT et en transcription in vitro utilise l'inhibiteur de ribonucléase à une concentration finale de 1 u/µl.

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