نقش و کاربرد m-mlv رورس ترانسکرتاز در زیست شناسی مولکولی

آنزیم ها در واکنش های بیوشیمی مختلف در رابطه با زمینه همیشه پویا زیست شناسی مولکولی نقش مرکزی داشته اند.m-mlv ترانسکرتاز معکوس(m-mlv rt) که یکی از این آنزیم ها است، اخیرا توجه زیادی را به خود جلب کرده است زیرا قادر به سنتز CDNA از الگوهای RNA است. این آنزیم که از ویروس لوسمی موش های مولونی (m-mlv) به دست می آید، در کلون کردن ژن، تجزیه و تحلیل بیان و مطالعات ژنومیک

ساختار و عملکرد ترانسکرتاز معکوس m-mlv

m-mlv رورس ترانسکرتاز به عنوان یک پلیمراز DNA وابسته به DNA با فعالیت های پلیمراز DNA وابسته به RNA و ریبونوکلیس h (rnase h) عمل می کند. این الگوهای RNA را تشخیص می دهد و سنتز رشته های CDNA را با استفاده از dntps به عنوان زیربنای انجام می دهد. فعالیت

کاربرد های m-mlv رورس ترانسکرتاز

سنتز CDNA: روش های ترجمه معکوس با استفاده از m-mlv rt روش های رایج برای تبدیل محتوای RNA به CDNA استفاده می شود. برای مطالعات پایین جریان از جمله PCR کمی، تجزیه و تحلیل بیان ژن یا ایجاد کتابخانه CDNA این تکنیک اجتناب ناپذیر است.

شبیه سازی ژن: با استفاده از m-mlv rt، محققان می توانند ژن های خاصی را از نمونه های RNA خود شبیه سازی کنند. در نتیجه، ژن های خاص می توانند جدا شده و تقویت شوند تا بتوانند از نظر عملکرد تجزیه و تحلیل شوند.

تجزیه و تحلیل بیان: یک مرحله ضروری در هر تکنیک تجزیه و تحلیل بیان مانند تجزیه و تحلیل qpcr یا میکروآرای شامل سنتز CDNAS توسط آنزیم از طریق فعالیت rnase h آن است. از طریق این روش ها دانشمندان فرصتی برای پیدا کردن چگونگی بیان ژن ها در نمونه های بیولوژیکی به گونه ای متفاوت دارند که به تفسیر تنظیم و عملکرد ژن

ژنومیک عملکردی: در ژنومیک عملکردی، m-mlv rt برای آماده سازی کتابخانه های CDNA از جمعیت های پیچیده RNA استفاده می شود. این کتابخانه ها سپس برای ژن هایی با عملکرد یا فنوتیپ های مشخص شده بررسی می شوند و در نتیجه بینش های جدیدی در مورد عملکرد و تعامل ژن را نشان می دهند.

مزایا و ملاحظات

ترانسکرتاز معکوس m-mlv دارای مزایای مختلفی مانند کارایی بالا، خاصیت و قابل تولید مجدد است. با این حال، باید توجه داشت که آنزیم در شرایط خاصی مانند دمای مطلوب، مقادیر ph و همچنین غلظت نمک به خوبی کار می کند. گاهی اوقات در طول سنتز cdna تخریب یک قالب rna ناشی از فعالیت r

در نتیجه، m-mlv رورس ترانسکرتاز یک ابزار مفید در تحقیقات زیست شناسی مولکولی برای ترکیب CDNA از الگوهای RNA برای کاربردهای مختلف است. شبیه سازی ژن، تجزیه و تحلیل بیان و مطالعات ژنومیک عملکردی به شدت به m-mlv rt متکی هستند زیرا دارای فعالیت های پلیمراز DNA وابسته به RNA و