مهار کننده ریبونوکلاز، مهار کننده رناز

مهار کننده ریبونوکلاز پلاسنتا بازتولید شده انسان، 40U/μl

منبع

گونه ای از E. coli که یک کلون ترکیب شده را بیان می کند که ژن مهار کننده ریبونوکلیس را از جفت انسان حمل می کند.

غلظت

40 واحد در لیتر

تعریف واحد

یک واحد به عنوان مقدار مورد نیاز مهار کننده ریبونوکلیز ترکیب شده تعریف می شود تا فعالیت 5ng ریبونوکلیز a را 50٪ مهار کند.

فعالیت این ماده با مهار هیدرولیز cytidine 23-cyclic monophosphate توسط ریبونوکلیس a اندازه گیری می شود.

بافر ذخیره سازی

20mm hepes-koh ((ph7.6), 50mm kcl, 8mm dtt, 50% ((v/v) گلیسیرول

ذخیره سازی

در -20°C نگهداری شود

کنترل کیفیت

عدم وجود اندونوکلیز
1μg از DNA لامبدا با 200 واحد مهار کننده ریبونوکلیز برای 16 ساعت در 37 درجه سانتیگراد تزریق می شود.
پس از انکوبیشن، DNA لامبدا به صورت سالم بر روی ژل آگاروز با رنگ برومید اتیدیوم به منظور تأیید عدم وجود اندونوکلیز قابل مشاهده به تصویر کشیده می شود.

عدم وجود نیکاز
1μg از pbr322 نوع I که در حال فراورده شدن است با 200 واحد مهار کننده ریبونوکلیز برای 4 ساعت در 37 درجه سانتیگراد تزریق می شود.
پس از انکوباسیون، DNA فوق لوله شده بر روی ژل آگاروز با رنگ برومید اتیدیوم به منظور بررسی عدم وجود شکاف یا برش قابل مشاهده، تجسم می شود.

عدم وجود اکسونوکلیز
۱μg از نشانگرهای لامپدا DNA/hindiii با ۲۰۰ واحد مهار کننده ریبونوکلیز برای ۱۶ ساعت در دما ۳۷ درجه سانتیگراد تزریق می شود.
پس از انکوبیشن، نشانگرهای DNA لامبدا/هندیii با ژل آگاروز ۱٪ جدا می شوند و با برومید اتیدیوم رنگ می شوند. نشانگرها بدون روغن کردن به صورت نوارهای سالم باقی می مانند.

عدم وجود rnase و rnase پنهان
برای آزمایش وجود فعالیت rnase، 1ug rna با 200 واحد مهار کننده ریبونوکلیز برای 4 ساعت در 37 °C تزریق می شود.
پس از انکوبیشن، RNA به صورت یک نوار سالم روی یک ژل آگاروز با رنگ برومید اتیدیوم به منظور تأیید عدم وجود rnase قابل مشاهده به تصویر کشیده می شود.
برای آزمایش وجود فعالیت rnase پنهان، 200 واحد از مهار کننده ریبونوکلیس در دمای 70 درجه سانتیگراد برای 15 دقیقه گرمایی را تغییر داده و با 1 یوگ rna برای 4 ساعت در 37 درجه سانتیگراد انکوبیشن می شود.
پس از انکوبیشن، RNA به صورت یک نوار سالم روی یک ژل آگاروز با رنگ برومید اتیدیوم به منظور تأیید عدم وجود rnase قابل مشاهده به تصویر کشیده می شود.

پاکدلی فیزیکی

طهارت ≥95٪ با استفاده از ژل sds-polyacrylamide با رنگ آبی coomassie.

یادداشت استفاده

مهار کننده ریبونوکلاز در محدوده گسترده ای از PH (ph5.5-9) فعال است.

نظم