ممانع ریبونوکلئاز، ممانع RNase 40 واحد در μل

ممانع ریبونوکلز بازتولیدی انسانی پلاسنتا، 40U/μl

منبع

نوع E. coli که یک کلون بازتولیدی شامل ژن مهارکننده ریبونوکلاز از پلاسنتای انسانی را بیان می‌کند.

غلظت

40 U/μl.

تعریف واحد

یک واحد به عنوان مقدار مهارکننده ریبونوکلاز بازتولیدی تعریف می‌شود که فعالیت 5 نانوگرم از ریبونوکلاز A را به میزان 50٪ مهار می‌کند.

فعالیت با مهار هیدرولیز سیتیدین 2'3'-سیکلیک مونوفسفات توسط ریبونوکلاز A اندازه‌گیری می‌شود.

مایع ذخیره‌سازی

20mM HEPES-KOH(PH7.6), 50mM KCl, 8mM DTT, 50%(v/v) گلایسرول

حافظه

در دماهای -20°C نگهداری شود

کنترل کیفیت

عدم وجود اندونوکلاز
یک میکروگرم DNA لامبدا با 200 واحد مهارکننده ریبونوکلاز برای 16 ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد کشت می‌شود.
پس از کشت، DNA لامبدا به صورت کامل روی ژل آگاروز استaining شده با برومید اتیدیوم قابل مشاهده است تا عدم وجود اندونوکلاز قابل مشاهده را تأیید کند.

عدم وجود نیکاز
یک میکروگرم pBR322 خمیری نوع I با 200 واحد مهارکننده ریبونوکلاز برای 4 ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد کشت می‌شود.
پس از کشت، DNA خمیری روی ژل آگاروز استaining شده با برومید اتیدیوم قابل مشاهده است تا عدم وجود نیکینگ یا برش قابل مشاهده را تأیید کند.

عدم وجود اکسونوکلاز
یک میکروگرم نشانگر Lambda DNA/HindIII با 200 واحد مهارکننده ریبونوکلاز برای 16 ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد کشت می‌شود.
پس از کشت، نشانگر Lambda DNA/HindIII توسط ژل آگاروز 1% جداسازی شده و با برومید اتیدیوم رنگ آمیزی می‌شود. نشانگرهای بدون پراکنش به صورت باند کامل باقی می‌مانند.

عدم وجود RNase و RNase پنهان
برای آزمایش وجود فعالیت RNase، یک میکروگرم RNA با 200 واحد مهارکننده ریبونوکلاز برای 4 ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد کشت می‌شود.
پس از حضن، RNA به صورت باند کامل روی ژل آگاروز با رنگ‌آمیزی برادیوم اتیدیوم مشاهده می‌شود تا غیاب RNase قابل دیده را تأیید کند.
برای آزمایش وجود فعالیت پنهان RNase، 200 واحد مهارکننده Ribonuclease در دماهای 70 درجه سانتیگراد برای 15 دقیقه حرارتی خراب شده و با 1 میکروگرم RNA برای 4 ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد حضن می‌شود.
پس از حضن، RNA به صورت باند کامل روی ژل آگاروز با رنگ‌آمیزی برادیوم اتیدیوم مشاهده می‌شود تا غیاب RNase قابل دیده را تأیید کند.

پاکیبود فیزیکی

پاکیبود حداقل 95٪ است که توسط ژل پلی‌اکریلامید SDS با رنگ‌آمیزی Coomassie blue تعیین شده است.

یادداشت استفاده

مهارکننده Ribonuclease در دامنه pH گسترده‌ای (pH5.5-9) فعال است. استفاده استاندارد RT و تراگیری in vitro از مهارکننده Ribonuclease با غلظت نهایی 1 واحد در میکرولیتر است.

سفارش