Ribonukleaasi inhibiitor, rnaasi inhibiitor 40 u ul

rekombineeriv inimplatsenta ribonukleaasi inhibiitor, 40 u/μl

allikas

e. coli tüve, mis väljendab rekombinantset klooni, mis kannab inimplatsenta ribonukleaasi inhibiitori geeni.

kontsentratsioon

40 u/μl.

üksuse määratlus

üks ühik on määratletud kui rekombineeriva ribonukleaasi inhibiitori vajalik kogus, mis inhibeerib 5 ng ribonukleaasi a aktiivsust 50% võrra.

Cytediin 23- tsüklilisest monofosfaatist ribonukleaasi a poolt hidrolüüsi inhibeerimisega mõõdetakse selle aktiivsust.

säilituspuffer

20 mm hepes-koh (ph7.6), 50 mm kcl, 8 mm dtt, 50% (v/v) glütserool

säilitamine

säilitada temperatuuril -20°c

kvaliteedi kontroll

endonukleaasi puudumine
1 μg lambda DNA inkubeeritakse 200 ühikut ribonukleaasi inhibiitorit 16 tunni jooksul temperatuuril 37°C.
Pärast inkubatsiooni kujutatakse lambda DNA-d eetiidiumbromiidiga värvitud agarosegelil tervena, et kontrollida nähtava endonukleaasi puudumist.

nikasa puudumine
1 μg I tüüpi superkoelist pbr322 inkubeeritakse 200 ühikut ribonukleaasi inhibiitorit 4 tundi 37°C juures.
Pärast inkubatsiooni visualiseeritakse superkooritud DNA etiidiumbromidiga värvitud agarosegelil, et kontrollida nähtavate näpistuste või lõikuste puudumist.

eksonukleaasi puudumine
1 μg lambda DNA/hindiii markereid inkubeeritakse 200 ühikut ribonukleaasi inhibiitorit 16 tunni jooksul temperatuuril 37°C.
Pärast inkubatsiooni eraldatakse lambda DNA/hindiii markeri 1% agarosegeliga ja värvitakse etiidiumbromidiga. Markerid jäävad tervena, ilma et neid määritaks.

rnaasi puudumine ja latentne rnaas
Rnaasi aktiivsuse tuvastamiseks inkubeeritakse 1 ug rna 200 ühikut ribonukleaasi inhibiitorit 4 tundi 37°C juures.
Pärast inkubatsiooni kujutatakse RNA-d ehteta ribana etiidiumbromiidiga värvitud agarosegelil, et kontrollida nähtava rnaasi puudumist.
Kui uuritakse latentse rnaasi aktiivsuse esinemist, denatureeritakse 200 ühikut ribonukleaasi inhibiitorit kuumuses 70°C juures 15 minutit ning inkubeeritakse 1 ug rnaga 4 tundi 37°C juures.
Pärast inkubatsiooni kujutatakse RNA-d ehteta ribana etiidiumbromiidiga värvitud agarosegelil, et kontrollida nähtava rnaasi puudumist.

füüsiline puhtus

puhtus on ≥ 95%, mida hinnatakse sds-polüakrülamiidgeeliga koos coomassie sinise värvusega.

kasutamismärkus

Ribonukleaasi inhibiitor on aktiivne laias pH vahemikus (ph5. 5-9).

korraldus