Ribonuklease Inhibitor, RNase inhibitor 40U ul

rekombinantne inimplatsentsa ribonuklease inhibiitor, 40U/μl

allikas

E. coli strand, mis väljendab rekombinantset klooni, mis kandeb inimplasentas olevat ribonukleasi inhibiitorigeeni.

Kontsentraatsioon

40 U/μl.

Ühikute defineerimine

Üks ühik on määratletud kui see osa rekombinantsest ribonukleasi inhibiitorist, mis vajalik on ribonukleasi A tegevuse 50% hävimiseks, kui selle kogus on 5 ng.

Tegevus mõõdetakse ribonukleasi A poolt toodud sitiidini 2’3’-tsükliline monofosfaatihütlemise hävimisega.

Hoidmispuhu

20mM HEPES-KOH(PH7.6), 50mM KCl, 8mM DTT, 50%(v/v) glycerool

salvestus

Hoida temperatuuril -20°C

Kvaliteedi juhtimine

Endonuklease puudumine
1μg Lambda DNA ühendatakse 200 uniti Ribonukleasi Inhibiitoriga 16 tundi temperatuuril 37°C.
Ühendamise järel nähtakse Lambda DNA täielikuna etiidibroomidega värvestatud agarose geelil, et kinnitada nähtava Endonukleasi puudumist.

Nickase puudumine
1μg tüübi I superkoolne pBR322 ühendatakse 200 uniti Ribonukleasi Inhibiitoriga 4 tundi temperatuuril 37°C.
Ühendamise järel visualiseeritakse superkoolne DNA etiidibroomidega värvestatud agarose geelil, et kinnitada nähtava nickimise või lõigamise puudumist.

Exonukleasi puudumine
1μg Lambda DNA/HindIII Märksed ühendatakse 200 uniti Ribonukleasi Inhibiitoriga 16 tundi temperatuuril 37°C.
Ühendamise järel eraldatakse Lambda DNA/HindIII Märksed 1% agarose geeliga ja neid värivistatakse etiidibroomidiga. Märksed jäävad täielikkuina bandideks ilma sumeerumiseta.

RNase ja latentiivse RNase puudumine
RNase tegevuse olemasolu testimiseks ühendatakse 1ug RNA 200 uniti Ribonukleasi Inhibiitoriga 4 tundi temperatuuril 37°C.
Pärast inkubatsiooni visualiseeritakse RNA täielikuna jalga etiidium bromiidiga värvestatud agarosegeelil, et kinnitada nähtava RNase puudumist.
Loodumatute RNase tegevuse olemasolu testimiseks denatureeritakse 200 ühikut Ribonukleasi inhibiitorit temperatuuril 70°C 15 minutiks ja see inkubeeritakse 1 µg RNA-ga 4 tundi temperatuuril 37°C.
Pärast inkubatsiooni visualiseeritakse RNA täielikuna jalga etiidium bromiidiga värvestatud agarosegeelil, et kinnitada nähtava RNase puudumist.

Füüsiline puhasus

Puhasus on ≥95%, nagu hinnati SDS-polyacrylaamidgeeliga koos Coomassie siniväravuga.

Kasutamisnäide

Ribonukleasi inhibiitor on aktiivne laias pH vahemikus (pH 5.5–9). Tavaline RT ja in vitro transkriptsioon kasutab Ribonukleasi inhibiitorit lõplikus kontsentratsioonis 1 u/µl.

tellimus