Inhibidor de la ribonucleasa, inhibidor de la rnas 40 u u

Inhibidor de la ribonucleasa de la placenta humana recombinante, 40 u/μl

Fuente de información

cepa de e. coli que expresa un clon recombinante que lleva el gen inhibidor de la ribonucleasa de la placenta humana.

concentración

40 u/μl.

definición de unidad

una unidad se define como la cantidad de inhibidor de la ribonucleasa recombinante requerida para inhibir la actividad de 5ng de la ribonucleasa a en un 50%.

La actividad se mide mediante la inhibición de la hidrólisis del monofosfato ctidina 23-cíclico por la ribonucleasa a.

el buffer de almacenamiento

20 mm de hepes-koh (ph7.6), 50 mm de kcl, 8 mm de dtt, 50% (v/v) de glicerol

almacenamiento

almacenar a -20°C

Control de calidad

ausencia de endonucleasa
Se incubará 1 μg de ADN lambda con 200 unidades de inhibidor de la ribonucleasa durante 16 horas a 37°C.
Después de la incubación, el ADN de la lambda se visualiza intacto en un gel de agarosa teñido de bromuro de etidio para verificar la ausencia de endonucleasa visible.

ausencia de niquasa
Se incubará 1 μg de pbr322 superenrolado de tipo i con 200 unidades de inhibidor de la ribonucleasa durante 4 horas a 37°C.
Tras la incubación, el ADN superenrolado se visualiza en un gel de agarosa teñido de bromuro de etidio para verificar la ausencia de cortes o cortes visibles.

ausencia de exonucleasa
Se incubará 1 μg de marcadores de ADN lambda/hindiii con 200 unidades de inhibidor de la ribonucleasa durante 16 horas a 37°C.
Después de la incubación, los marcadores de ADN lambda/hindiii se separan con un 1% de gel de agarosa y se teñen con bromuro de etidio. Los marcadores permanecen intactos sin manchar.

ausencia de rnasas y rnasas latentes
Para evaluar la presencia de actividad de la rnasas, se incubará 1 ug de rna con 200 unidades de inhibidor de la ribonucleasa durante 4 horas a 37°C.
Después de la incubación, el ARN se visualiza como una banda intacta en un gel de agarosa teñido de bromuro de etidio para verificar la ausencia de arnasa visible.
Para comprobar la presencia de actividad latente de la rnasas, 200 unidades de inhibidor de la ribonucleasa se desnaturalizan en calor a 70°C durante 15 minutos e incubadas con 1 ug de rna durante 4 horas a 37°C.
Después de la incubación, el ARN se visualiza como una banda intacta en un gel de agarosa teñido de bromuro de etidio para verificar la ausencia de arnasa visible.

La pureza física

la pureza es ≥95% según lo juzgado por el gel de poliacrilamida sds con tinción azul coomassie.

Nota de uso

La transcripción estándar rt y in vitro utiliza un inhibidor de la ribonucleasa en una concentración final de 1 u/ ul.

orden