polia polimerasa en preparados de secuenciación de próxima generación (ngs)

polia polimerasa(PAP) es una acción enzimática clave que es responsable de agregar la cola de poli-A al extremo 3’ de las moléculas de ARN. Esta actividad tiene un papel significativo en la estabilidad general, el transporte y la traducción del ARN. Sin embargo, dentro del marco de NGS, PAP permite la adición del oligo A a las muestras de ARN antes de la secuenciación para que se puedan adquirir datos de alta calidad de diversas fuentes de ARN.

La importancia de agregar cola de poli A

Hay muchas ventajas asociadas a la incorporación de cola de poli A al ARNm. En primer lugar, la cola A ayuda a mejorar la estabilidad de las moléculas de ARN contra la actividad de ribonucleasas por parte de exonucleasas. En segundo lugar, la cola de poli A tiene un papel en la iniciación de la traducción a través de la promoción de la unión del ribosoma al ARNm. En el caso de las preparaciones de NGS, el ARNm con cola de poli A se puede utilizar fácilmente para un análisis más enfocado de la expresión génica junto con variaciones de transcritos, ya que pueden ser enriquecidos específicamente.

Preparación de muestras de NGS

Los flujos de trabajo de NGS incluyen la preparación de las muestras de ARN que implican los siguientes pasos: transcripción inversa, construcción de CDNA y amplificación. También es común agregar polimerasa de poli A durante la síntesis de CDNA para incluir una cola de poli-A en las moléculas de cDNA finales. Esta modificación es crítica para la amplificación y secuenciación de bibliotecas, ya que aumenta la eficiencia de los pasos involucrados en la preparación de las bibliotecas.

Aplicaciones en RNA-Seq

PAP también es muy útil en aplicaciones de secuenciación de ARN (RNA-Seq) porque permite un enriquecimiento más eficiente para el ARN mensajero con cola de poli A. Esto ayuda a capturar una imagen más clara a nivel de transcriptoma del organismo en estudio. Así, tal mejora puede ayudar a determinar genes expresados diferencialmente, eventos de empalme alternativo o incluso ARN no codificantes. Además, incluir PAP en las preparaciones de NGS permite obtener datos más prometedores.

Agregar PAP en las preparaciones de NGS puede mejorar en gran medida la calidad y precisión de los datos de secuenciación. Lo que es más importante, a medida que la investigación continúa avanzando, la importancia de PAP para permitir que los científicos investiguen el transcriptoma seguirá siendo fundamental.