Ο ρόλος της m-mlv αντιστροφής μεταγραφάσης στη σύνθεση του cdna

m-mlv αντιστροφή μεταγραφάσηςείναι ένα δημοφιλές ένζυμο στη μοριακή βιολογία που καταλύει τη μεταγραφή του RNA σε συμπληρωματικό DNA (cdna) και προέρχεται από τον ιό λευχαιμίας Moloney murine. Είναι ένα απαραίτητο ένζυμο για την κλωνοποίηση και τη αλληλουχία των γονιδίων και

εφαρμογές στη μοριακή βιολογία

Ένα από τα πιο κοινά είδη χρήσης της m-mlv αντίστροφης μεταγραφής είναι στον τομέα των μελετών της γονιδιακής έκφρασης. Αυτό γίνεται συχνά με αντίστροφη μεταγραφή του mRNA, το οποίο είναι μετατρέψιμο σε cdna, επιτρέποντας την εκτίμηση των επιπέδων έκ

πλεονεκτήματα και περιορισμοί

Η m-mlv αντιστροφή μεταγραφάση έχει ορισμένα οφέλη, μεταξύ των οποίων η ικανότητα να επιτρέπει υψηλή διεργασιμότητα και πιστότητα, τα οποία είναι επιθυμητά στη σύνθεση μακρών μορίων CDNA. Ωστόσο, υπάρχουν ορισμένα μειονεκτήματα με αυτό το ένζυμο,

τεχνικές και πρωτόκολλα

Για να χρησιμοποιηθεί αποτελεσματικά η M-MLV Αντίστροφη Μεταγραφάση, πρέπει να δοθεί ιδιαίτερη προσοχή σε παράγοντες όπως η επιλογή των εκκινητών, η θερμοκρασία αντίδρασης και η σύνθεση του διαλύτη μεταξύ άλλων. Οι εκκινητές πρέπει να κατασκευάζονται έτσι ώστε να μην υπάρχουν βρόχοι και ότι η σύνδεση με το RNA πρότυπο να είναι μέγιστη. Θεωρείται βέλτιστη για μια ενζυμική αντίδραση, 42°C είναι μια θερμοκρασία που είναι κοινή για τέτοιες αντιδράσεις ώστε η δραστηριότητα και η σταθερότητα του ενζύμου να είναι βέλτιστες. Αντίθετα, η χρήση άλλων ουσιών όπωςαναστολείς της ρινάσηςμπορεί επίσης να διατηρήσει το RNA που θα αποικοδομηθεί κατά τη διάρκεια της αντίδρασης.

μελλοντικές προοπτικές

Η περαιτέρω βελτίωση της βιοτεχνολογίας θα μας βοηθήσει επίσης να προχωρήσουμε περαιτέρω στη χρήση της m-mlv αντιστροφής της μεταγραφής. Οι νέες στρατηγικές που είναι διαθέσιμες σήμερα περιλαμβάνουν την κατασκευή των ενζύμων που τροποποιούνται από μηχανικούς με τις επιθυμητές ιδιότητες

Συνοπτικά, η m-mlv reverse transcriptase αποτελεί ουσιαστικό χαρακτηριστικό στην έρευνα της μοριακής βιολογίας λόγω της σημασίας που έχει για την εισαγωγή του cdna στα κύτταρα.