∆ιαστολείς ριβοπυρηνικής αγωγής, ρινοασης 40

Ανασυνδυασμένος αναστολέας ριβοπυρηνικής αγωγής του πλακούντα, 40u/μl

πηγή

στέλεχος E. coli που εκφράζει ένα ανασυνδυασμένο κλώνο που μεταφέρει γονίδιο αναστολέα ριβονουκλεάσης από ανθρώπινο πλακούντα.

συγκέντρωση

40 μ.ου./μl.

Ορισμός μονάδας

μία μονάδα ορίζεται ως η ποσότητα αναδυόμενου αναστολέα ριβονουκλεάσης που απαιτείται για να αναστείλει την δραστηριότητα 5ng ριβονουκλεάσης α κατά 50%.

Η δραστικότητα μετριέται με την αναστολή της υδρόλυσης της κυτιδίνης 23- κυκλικού μονοφωσφορικού από ριβοπυρηνική α.

αποθηκευτικό απόθεμα ασφαλείας

20 mm hepes-koh ((ph7.6), 50 mm kcl, 8 mm dtt, 50% (v/v) γλυκερίνη

αποθήκευση

αποθηκεύεται σε θερμοκρασία -20°C

Ελέγχος ποιότητας

απουσία ενδοπυρήνασης
1 μg λανμπντα DNA εκκολάπτεται με 200 μονάδες αναστολέα ριβονουκλεάσης για 16 ώρες σε θερμοκρασία 37°C.
Μετά την επώαση, το DNA λαμπντά απεικονίζεται ως άθικτο σε ένα τζελ αγαρόζης με βρομίδιο αιθυδίου για να επαληθευτεί η απουσία ορατής ενδοπυρήνας.

απουσία νικάζης
1 μg pbr322 τύπου i σε υπερτροχιά εκκολάπτεται με 200 μονάδες αναστολέα ριβονουκλεάσης για 4 ώρες σε θερμοκρασία 37°C.
Μετά την επώαση, το υπερστροφικό DNA απεικονίζεται σε ένα τζελ αγαρόζης με βρομίδιο αιθυδίου για να επαληθευτεί η απουσία ορατών κοψίματος ή κοπής.

απουσία εξωπυρήνασης
1 μg δεικτών lambda dna/hindiii εκκολάπτονται με 200 μονάδες αναστολέα ριβονουκλεάσης για 16 ώρες σε θερμοκρασία 37°C.
Μετά την επώαση, οι δείκτες lambda DNA/hindiii διαχωρίζονται με 1% τζελ αγαρόζης και χρωματίζονται με βρομίδιο αιθυδίου. Οι δείκτες παραμένουν άθικτες ζώνες χωρίς να αλείφονται.

απουσία ρινάσης και λανθάνουσα ρινάση
Για να ελεγχθεί η παρουσία δραστηριότητας της ρινάσης, 1 μg ρινάλης εκκολάπτεται με 200 μονάδες αναστολέα ριβονουκλεάσης για 4 ώρες σε θερμοκρασία 37°C.
Μετά την επώαση, το RNA απεικονίζεται ως άθικτη ζώνη σε ένα τζελ αγαρόζης με βρομίδιο αιθυδίου για να επαληθευτεί η απουσία ορατής rnase.
Για να ελεγχθεί η παρουσία λανθάνουσας δραστηριότητας της ριβονουκλεάσης, 200 μονάδες αναστολέα ριβονουκλεάσης θερμικά εκμηδενίζονται σε θερμοκρασία 70°C για 15 λεπτά και επωάζονται με 1 μg ρινοαμίνης
Μετά την επώαση, το RNA απεικονίζεται ως άθικτη ζώνη σε ένα τζελ αγαρόζης με βρομίδιο αιθυδίου για να επαληθευτεί η απουσία ορατής rnase.

φυσική καθαρότητα

Η καθαρότητα είναι ≥95% όπως κρίνεται με σίδηρο polyacrylamide gel με γαλάζιο χρώμα coomassie.

σημείωμα χρήσης

Η τυπική rt και in vitro μεταγραφή χρησιμοποιεί αναστολέα ριβονουκλεάσης σε τελική συγκέντρωση 1u/ ul.

Τάξη