Rnase-Hemmer

Rekombinanten menschlichen Plazenta-Ribonuklease-Hemmer, 40 u/μl

Quelle

E. coli-Stamm, der einen rekombinanten Klone ausdrückt, der ein Ribonuklease-Inhibitor-Gen aus der menschlichen Plazenta trägt.

Konzentration

40 m/l.

Einheitsdefinition

Eine Einheit ist definiert als die Menge an rekombinanten Ribonuklease-Hemmern, die erforderlich ist, um die Aktivität von 5ng Ribonuklease a um 50% zu hemmen.

Die Aktivität wird durch die Hemmung der Hydrolyse von Cytidin 23-cyclischem Monophosphor durch Ribonuklease a gemessen.

Speicherpuffer

20 mm Hepes-koh ((ph7.6), 50 mm Kcl, 8 mm Dtt, 50% (v/v) Glycerin

Aufbewahrung

bei -20°C aufbewahren

Qualitätskontrolle

Abwesenheit von Endonuklease
1 μg Lambda-DNA wird mit 200 Einheiten Ribonuklease-Hemmer 16 Stunden lang bei 37°C inkubiert.
Nach der Inkubation wird die Lambda-DNA intakt auf einem mit Ethidiumbromid befleckten Agarose-Gel dargestellt, um die Abwesenheit sichtbarer Endonuklease zu überprüfen.

Nichase fehlt
1 μg Typ I-supergewickeltes PBR322 wird mit 200 Einheiten Ribonukleasehemmer 4 Stunden lang bei 37°C inkubiert.
Nach der Inkubation wird die übergewickelte DNA auf einem mit Ethidiumbromid gefärbten Agarose-Gel visualisiert, um zu überprüfen, ob keine sichtbaren Schnitte oder Schnitte vorliegen.

Abwesenheit von Exonuklease
1 μg von Lambda-DNA/hindiii-Markern werden mit 200 Einheiten Ribonuklease-Inhibitor 16 Stunden lang bei 37°C inkubiert.
Nach der Inkubation werden die Lambda-DNA/hindiii-Marker durch ein Agarose-Gel von 1% getrennt und mit Ethidiumbromid gefärbt. Die Marker bleiben als intakte Bande ohne Aufschmieren.

Abwesenheit von Rnase und latente Rnase
Um auf die Anwesenheit von Rnaseaktivität zu testen, wird 1 ug Rna 4 Stunden lang bei 37°C mit 200 Einheiten Ribonukleasehemmer inkubiert.
Nach der Inkubation wird die RNA als intaktes Band auf einem mit Ethidiumbromid gefärbten Agarose-Gel visualisiert, um die Abwesenheit sichtbarer Rnase zu überprüfen.
Um auf das Vorhandensein latenter Rnase-Aktivität zu prüfen, werden 200 Einheiten des Ribonuklease-Inhibitors 15 Minuten lang bei 70°C thermisch denaturiert und 4 Stunden lang bei 37°C mit 1 ug Rna inkubiert.
Nach der Inkubation wird die RNA als intaktes Band auf einem mit Ethidiumbromid gefärbten Agarose-Gel visualisiert, um die Abwesenheit sichtbarer Rnase zu überprüfen.

körperliche Reinheit

Die Reinheit beträgt ≥ 95%, gemessen an sds-Polyacrylamid-Gel mit coomassie-blauer Färbung.

Anmerkung zur Verwendung

Die Standard-RT und in vitro-Transkription verwenden einen Ribonuklease-Hemmer in einer Endkonzentration von 1 u/ul.

Ordnung