Inhibitory ribonukleáz, inhibitory rnáz

rekombinantní inhibitor lidské placenty ribonukleázy, 40 u/μl

zdroj

kmen e. coli, který vyjadřuje rekombinantní klon, který je nositelem genu inhibitoru ribonukleázy z lidské placenty.

koncentrace

40 u/μl.

definice jednotky

jedna jednotka je definována jako množství rekombinantního inhibitoru ribonukleázy potřebného k omezování aktivity 5ng ribonukleázy a o 50%.

Aktivita je měřena inhibicí hydrolýzy cytidinu 23-cyklického monofosfátu ribonukleázou a.

skladovací puffer

20 mm hepes-koh ((ph7.6), 50 mm kcl, 8 mm dtt, 50% ((v/v) glycerolu

skladování

uchovávat při -20°C

kontrola kvality

absence endonukleázy
1 μg lambda DNA se inkubací 200 jednotek inhibitoru ribonukleázy po dobu 16 hodin při teplotě 37°C.
po inkubaci se lambda DNA zobrazí jako neporušená na agarózovém gelu s ethidium bromidem, aby se ověřilo, zda není viditelná endonukleáza.

nepřítomnost nikázy
1 μg pbr322 typu i v supervalém stavu se inkubuje 200 jednotkami inhibitoru ribonukleázy po dobu 4 hodin při 37 °C.
po inkubaci se supervyvíjená DNA vizualizuje na agarózovém gelu s ethidium bromidem, aby se ověřilo, zda není viditelné odříznutí nebo odříznutí.

absence exonukleázy
1 μg markerů lambda dna/hindiii se inkubací 200 jednotek inhibitoru ribonukleázy po dobu 16 hodin při 37°C.
po inkubaci jsou markery lambda DNA/hindiii odděleny 1% agarózovým gelem a zabarveny bromidem ethidiu.

absence rnázy a latentní rnázy
k vyšetření na přítomnost aktivity rnázy se 1 ug rnázy inkubuje s 200 jednotkami inhibitoru ribonukleázy po dobu 4 hodin při 37°C.
Po inkubaci se RNA zobrazí jako neporušená páska na agarózovém gelu s ethidium bromidem, aby se ověřilo, zda není viditelná rnáza.
Pro zjištění přítomnosti latentní aktivity rnázy se 200 jednotek inhibitoru ribonukleázy denaturuje tepelně při 70 °C po dobu 15 minut a inkubuje se 1 ug rna po dobu 4 hodin při 37 °C.
Po inkubaci se RNA zobrazí jako neporušená páska na agarózovém gelu s ethidium bromidem, aby se ověřilo, zda není viditelná rnáza.

fyzická čistot

čistotě ≥ 95%, jak je posouzeno s sds-polyacrylamidovým gelem s modrým barvením coomassie.

Poznámka o použití

Standardní transkripce rt a in vitro používá inhibitor ribonukleázy v konečné koncentraci 1 u/ ul.

řád