পরবর্তী প্রজন্মের সিকোয়েন্সিং (এনজিএস) প্রস্তুতিতে পলি-এ পলিমারেজ
পলি-এ পলিমারেজ(PAP) হল একটি মূল এনজাইমেটিক ক্রিয়া যা RNA অণুর 3’ প্রান্তে পলি-এ টেইল যোগ করার জন্য দায়ী। এই কার্যকলাপ RNA এর সামগ্রিক স্থায়িত্ব, পরিবহন এবং অনুবাদের ক্ষেত্রে একটি গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে। তবে NGS এর কাঠামোর মধ্যে, PAP RNA নমুনাগুলিতে সিকোয়েন্সিংয়ের আগে A অলিগো যোগ করার অনুমতি দেয় যাতে বিভিন্ন RNA উৎস থেকে উচ্চ মানের ডেটা অর্জন করা যায়।
পলি এ টেইলিং যোগ করার গুরুত্ব
mRNA তে পলি A টেইল সংযোজনের সাথে অনেক সুবিধা রয়েছে। প্রথমত, A টেইল RNA অণুর স্থায়িত্ব বাড়াতে সহায়তা করে রাইবোনিউক্লিয়েজ কার্যকলাপের বিরুদ্ধে এক্সোনিউক্লিয়েজ দ্বারা। দ্বিতীয়ত, পলি A টেইল অনুবাদ শুরুতে ভূমিকা পালন করে mRNA তে রাইবোজোম সংযুক্তির প্রচারের মাধ্যমে। NGS প্রস্তুতির ক্ষেত্রে, পলি A-টেইলযুক্ত mRNA সহজেই আরও কেন্দ্রীভূত জিন প্রকাশ বিশ্লেষণের জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে পাশাপাশি ট্রান্সক্রিপ্ট পরিবর্তনের সাথে যেহেতু সেগুলি বিশেষভাবে সমৃদ্ধ করা যেতে পারে।
NGS নমুনা প্রস্তুতি
এনজিএস ওয়ার্কফ্লোগুলির মধ্যে আরএনএ নমুনাগুলির প্রস্তুতি অন্তর্ভুক্ত রয়েছে যা নিম্নলিখিত পদক্ষেপগুলি জড়িত: রিভার্স ট্রান্সক্রিপশন, সিডিএনএ নির্মাণ, এবং অ্যাম্প্লিফিকেশন। সিডিএনএ সংশ্লেষণের সময় পলিএ পলিমারেজ যোগ করা সাধারণ, যাতে চূড়ান্ত সিডিএনএ অণুগুলিতে একটি পলিএ-টেইল অন্তর্ভুক্ত করা যায়। এই পরিবর্তনটি লাইব্রেরি অ্যাম্প্লিফিকেশন এবং সিকোয়েন্সিংয়ের জন্য গুরুত্বপূর্ণ কারণ এটি লাইব্রেরিগুলির প্রস্তুতির সাথে জড়িত পদক্ষেপগুলির দক্ষতা বাড়ায়।
আরএনএ-সিকোয়েন্সিংয়ে অ্যাপ্লিকেশন
পিএপি আরএনএ সিকোয়েন্সিং (আরএনএ-সিক) অ্যাপ্লিকেশনগুলিতে খুবই উপকারী কারণ এটি পলিএ-টেইলযুক্ত এমআরএনএ-এর জন্য আরও কার্যকর সমৃদ্ধি অনুমোদন করে। এটি অধ্যয়নরত জীবের ট্রান্সক্রিপ্টোম স্তরের একটি পরিষ্কার চিত্র ধারণ করতে সহায়তা করে। অতএব, এই ধরনের উন্নতি বিভিন্নভাবে প্রকাশিত জিন, বিকল্প স্প্লাইসিং ইভেন্ট, বা এমনকি নন-কোডিং আরএনএ নির্ধারণ করতে সহায়ক হতে পারে। তদুপরি, এনজিএস প্রস্তুতিতে পিএপি অন্তর্ভুক্ত করা আরও প্রতিশ্রুতিশীল তথ্য পাওয়ার অনুমতি দেয়।
এনজিএস প্রস্তুতিতে পিএপি যোগ করা সিকোয়েন্সিং ডেটার গুণমান এবং সঠিকতা ব্যাপকভাবে উন্নত করতে পারে। আরও গুরুত্বপূর্ণ, গবেষণা অব্যাহত থাকার সাথে সাথে, বিজ্ঞানীদের ট্রান্সক্রিপ্টোম তদন্ত করার জন্য পিএপির গুরুত্ব প্রধান থাকবে।