Riboqnaz İnhibitörü, RNase İnhibitörü 40U μl

rekombinant İnsan Plasentası Ribonükleaz İnhibitörü, 40U/μl

mənbə

İnsan plasentasından Ribonükleaz İnhibitörü genini bərpa edən E. coli ştraynı ifadə edir.

Konsentratsiya

40 U/μl.

Vahid Təyinatı

Bir vahid, ribonükleaz A-nın aktivliyini 5 ng-ə qarşı 50%-də dayandırmalı olan Rekombinant Ribonükleaz İnhibitorun miqdarı kimi təyin olunur.

Aktivlik, ribonükleaz A tərəfindən citidin 2'3'-siklik monofosfatının hidrolizinin dayandırılması yolu ilə ölçülür.

Saxlama Bufferi

20mM HEPES-KOH(PH7.6), 50mM KCl, 8mM DTT, 50%(h/h) glicerol

yaddaş

-20°C-də saxlayın

Keyfiyyət nəzarəti

Endonükleaz yoğdur
1μg Lambda DNA, 200 unit Ribonuclease İnhibitörü ilə 37°C temperaturada 16 saat inkubasiya edilir.
Inkubasiya sonunda, Lambda DNA, etidium brom-stikiulişli agaroz gelində tam olaraq görünürlüyünə əsasən, görən Endonuklezinin yoxluğunu təsdiqləmək üçün nəzarət edilir.

Nickase-nin yoxluğu
1μg Tip I süperdövri pBR322, 200 unit Ribonuclease İnhibitörü ilə 37°C temperaturada 4 saat inkubasiya edilir.
Inkubasiya sonunda, süperdövri DNA, görünür nicklər və ya kesimlərin yoxluğunu təsdiqləmək üçün, etidium brom-stikiulişli agaroz gelində nəzarət edilir.

Exonuclease-nin yoxluğu
1μg Lambda DNA/HindIII Markərləri, 200 unit Ribonuclease İnhibitörü ilə 37°C temperaturada 16 saat inkubasiya edilir.
Inkubasiya sonunda, Lambda DNA/HindIII Markərləri, 1% agaroz gella ayırılır və etidium bromu ilə stikiulişdirilir. Markərlər smearing olmadan tam band kimi qalır.

RNase və latenti RNase-nin yoxluğu
RNase aktivitəsinin mövcudluğunu sinəmək üçün, 1ug RNA, 200 unit Ribonuclease İnhibitörü ilə 37°C temperaturada 4 saat inkubasiya edilir.
İnkubasiya sonunda, görünür RNase-nin olmamasını təsdiq etmək üçün RNA, etidium bromid ilə doldurulmuş agaroz gel-də tam band kimi göstərilir.
Latenti RNase aktivitəsinin varlığına görə 200 unit Ribonükleaz İnhibitörü 70°C temperaturdakı 15 dəqiqəlik istifadə ilə termik dənətirilir və 1ug RNA ilə 37°C temperaturdakı 4 saat boyu inkubasiya edilir.
İnkubasiya sonunda, görünür RNase-nin olmamasını təsdiq etmək üçün RNA, etidium bromid ilə doldurulmuş agaroz gel-də tam band kimi göstərilir.

Fiziki Çişmiyyət

Coomassie mavi steyndən sonra SDS-poliakrilamid gelləri ilə qiymətləndirildikdə, çişmiyyət ≥95%-dir.

İstifadə Qeydi

Ribonükleaz İnhibitörü geniş bir pH diapazonunda (pH5.5-9) fəaliyyət göstərir. Standart RT və in vitro transkripsiyada Ribonükleaz İnhibitörü nihayi kontraksiyada 1u/ul olaraq istifadə olunur.

sifariş