پولئپلی پولیمراز یئنی نسل سیخینتیسی (ngs) حاضیرلامالارین دا

پوليمراز(PAP) RNA molekullarının 3’ ucuna poly-A quyruğunun əlavə edilməsindən məsul olan əsas enzimatik fəaliyyətdir. Bu fəaliyyət RNA-nın ümumi sabitliyi, daşınması və tərcüməsində əhəmiyyətli rol oynayır. Lakin NGS çərçivəsində PAP, yüksək keyfiyyətli məlumatların müxtəlif RNA mənbələrindən əldə edilməsi üçün sekvensiyadan əvvəl RNA nümunələrinə A oligo əlavə etməyə imkan tanıyır.

Poly A Tailing-in Əhəmiyyəti

mRNA-ya poly A quyruğunun daxil edilməsinin bir çox üstünlükləri var. İlk növbədə, A quyruğu RNA molekullarının ribonukleaz fəaliyyətinə qarşı sabitliyinin artırılmasına kömək edir. İkincisi, poly A quyruğu ribosomun mRNA-ya bağlanmasını təşviq edərək tərcümə başlanğıcında rol oynayır. NGS hazırlıqları zamanı, poly A quyruğu olan mRNA daha spesifik zənginləşdirilə biləcəyi üçün daha fokuslanmış gen ifadəsi analizi üçün asanlıqla istifadə oluna bilər.

NGS Nümunə Hazırlığı

NGS iş axınları, aşağıdakı addımları əhatə edən RNA nümunələrinin hazırlanmasını əhatə edir: tərs transkripsiya, CDNA qurulması və amplifikasiya. CDNA sintezi zamanı son cDNA molekullarında poly-A quyruğu daxil etmək üçün Poly A polimerazanın əlavə edilməsi də adi haldır. Bu dəyişiklik kitabxana amplifikasiyası və sekvensiyalaşdırma üçün kritikdir, çünki bu, kitabxanaların hazırlanmasında iştirak edən addımların səmərəliliyini artırır.

RNA-Seq-də tətbiqlər

PAP, poly A quyruğu olan mRNA üçün daha səmərəli zənginləşdirməyə imkan verdiyi üçün RNA sekvensiyalaşdırma (RNA-Seq) tətbiqlərində də çox faydalıdır. Bu, tədqiq olunan orqanizmin transkriptom səviyyəsində daha aydın bir mənzərəni tutmağa kömək edir. Beləliklə, bu cür inkişaf, fərqli ifadə olunan genlərin, alternativ splicing hadisələrinin və ya hətta kodlaşdırmayan RNAların müəyyən edilməsində kömək edə bilər. Bundan əlavə, NGS hazırlıqlarında PAP-ın daxil edilməsi daha ümidverici məlumatların əldə edilməsinə imkan tanıyır.

NGS hazırlıqlarında PAP əlavə edilməsi sekanslama məlumatlarının keyfiyyətini və dəqiqliyini əhəmiyyətli dərəcədə artırır. Daha da önəmlisi, tədqiqatlar irəlilədikcə, elmi işçilərin transkriptomunu araşdırmalarına imkan tanıyan PAP-ın əhəmiyyəti böyük olaraq qalacaq.