مثبط ريبونوكلياز، مثبط رناز 40

مثبط ريبونوكلياز المشيمة البشرية المتجددة، 40 يو/μl

المصدر

سلالة (إ. كولاي) تعبر عن استنساخ متجدد يحمل جين مثبط ريبونوكلياز من المشيمة البشرية.

التركيز

40 وحدة/ميلتر

تعريف الوحدة

وحدة واحدة تعريف كمية من مثبطات الريبونوكلياز المتشابكة المطلوبة لتثبيط نشاط 5ng من الريبونوكلياز أ بنسبة 50٪.

يتم قياس نشاطها عن طريق تثبيط هيدروليز سيتيدين 23- monophosphate الدوري بواسطة الريبونوكلياز a.

عازل التخزين

20 مليمتر هيبيس-كوه ((ph7.6) ، 50 مليمتر كيلو كلور، 8 مليمتر ديت، 50 ٪ ((v/v) غليسرول

التخزين

تخزين عند -20 درجة مئوية

مراقبة الجودة

غياب الغدد النووية
يتم حضان 1 ميكروغرام من حمض النوو اللامبدا مع 200 وحدة من مثبط ريبونوكلياز لمدة 16 ساعة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية.
بعد الحضانة، يتم تصوير الحمض النووي اللامبدا كما هو سليم على هلام الأجاروز الملوث بروميد الإثيديوم للتحقق من غياب النووي النهائي المرئي.

غياب النيكاز
يتم حضان 1 ميكروغرام من pbr322 من النوع I الملفوفة بشكل فائق مع 200 وحدة من مثبط ريبونوكلياز لمدة 4 ساعات عند درجة حرارة 37 درجة مئوية.
بعد الحضانة، يتم تصوير الحمض النووي الملفوف على جيل الأغاروز الملوث بروميد الإثيديوم للتحقق من عدم وجود حطام أو قطع مرئي.

غياب الجراثيم
يتم حضان 1 ميكروغرام من علامات حمض اللامدا دي إن إيه/هندي آي مع 200 وحدة من مثبط الريبونوكلياز لمدة 16 ساعة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية.
بعد الحضانة، يتم فصل علامات حمض النوو اللامبدا/هندي آي بواسطة 1% من هلام الأغاروز ويتم تلوينها بروميد الإثيديوم. تبقى علامات النمط كشرائط سليمة دون تلوين.

غياب الرناز والرناز الكامن
لاختبار وجود نشاط rnase، يتم استحضان 1 ug من rna مع 200 وحدة من مثبط ريبونوكلياز لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية.
بعد الحضانة، يتم تصور الحمض النووي الريبوزي كشريط سليم على هلام الأغاروز الملوث بالبروميد الإثيديوم للتحقق من غياب الحمض النووي الريبوزي المرئي.
لاختبار وجود نشاط rnase الكامن، يتم تغيير 200 وحدة من مثبط ريبونوكلياز في الحرارة عند 70 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة وتحضيرها مع 1 يوغ من rna لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية.
بعد الحضانة، يتم تصور الحمض النووي الريبوزي كشريط سليم على هلام الأغاروز الملوث بالبروميد الإثيديوم للتحقق من غياب الحمض النووي الريبوزي المرئي.

النقاء الجسدي

النقاء ≥ 95% كما هو محكوم بهل sds-polyacrylamide مع تلوين أزرق coomassie.

ملاحظة الاستخدام

المثبط الرابونوكلياز نشط على نطاق واسع من PH (ph5. 5- 9).

النظام