مثبط الريبونوكلياز، مثبط RNase 40 وحدة/مايكروليتر

مثبط الريبونوكلياز البشرية المُعاد تشكيلها من المشيمة، 40U/μl

مصدر

سلالة E. coli التي تعبر عن نسخة مُعاد تشكيلها تحمل جين مثبط الريبونوكلياز من المشيمة البشرية.

التركيز

40 وحدة/μl.

تعريف الوحدة

تُعرَّف الوحدة الواحدة على أنها الكمية من مثبط الريبونوكلياز المُعاد تشكيلها المطلوبة لمنع نشاط 5 نانوجرام من الريبونوكلياز A بنسبة 50%.

يُقاس النشاط من خلال منع تحلل السيتيدين 2'3'-سيكليك مونوفوسفات بواسطة الريبونوكلياز A.

محلول التخزين

20mM HEPES-KOH (PH7.6)، 50mM KCl، 8mM DTT، 50% (v/v) الجليسيرول

تخزين

احفظ عند -20°C

التحكم في الجودة

غياب إنزيم إندونوكلياز
تُحضَّن 1 ميكروغرام من الحمض النووي للامدا مع 200 وحدة من مثبط ريبونوكلياز لمدة 16 ساعة عند 37 درجة مئوية.
بعد التحضين، يتم تصوير الحمض النووي لامدا ككامل على جل الأغاريوز الملون ببروميد الإيثيديوم للتحقق من غياب إندونوكلياز مرئي.

غياب نيكساز
تُحضَّن 1 ميكروغرام من pBR322 الدائري من النوع الأول مع 200 وحدة من مثبط ريبونوكلياز لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية.
بعد التحضين، يتم تصوير الحمض النووي الدائري على جل الأغاريوز الملون ببروميد الإيثيديوم للتحقق من غياب القطع أو الشقوق المرئية.

غياب إكسبونوكلياز
تُحضَّن 1 ميكروغرام من علامات Lambda DNA/HindIII مع 200 وحدة من مثبط ريبونوكلياز لمدة 16 ساعة عند 37 درجة مئوية.
بعد التحضين، يتم فصل Lambda DNA/HindIII Markers بواسطة جل الأغاريوز بنسبة 1% وتصبغ ببروميد الإيثيديوم. تظل العلامات كأشرطة كاملة دون تشويش.

غياب RNase والـ RNase الكامنة
لاختبار وجود نشاط RNase، يتم حضن 1 ميكروغرام من RNA مع 200 وحدة من مثبط Ribonuclease لمدة 4 ساعات عند 37°C.
بعد الحضن، يتم تصوير RNA كحزمة سليمة على جل الأغاريوز الملون ببروميد الإيثيديوم للتحقق من غياب RNase المرئية.
لاختبار وجود نشاط RNase الكامن، يتم تحلل 200 وحدة من مثبط Ribonuclease بالحرارة عند 70°C لمدة 15 دقيقة ثم حضنها مع 1 ميكروغرام من RNA لمدة 4 ساعات عند 37°C.
بعد الحضن، يتم تصوير RNA كحزمة سليمة على جل الأغاريوز الملون ببروميد الإيثيديوم للتحقق من غياب RNase المرئية.

النقاء الفيزيائي

النقاء ≥95% كما يُحكم عليه بواسطة جل البولي أكريلاميد SDS مع صبغ Coomassie blue.

ملاحظة الاستخدام

مثبط Ribonuclease نشط في نطاق pH الواسع (pH5.5-9). يستخدم RT القياسي والنسخ الاصطناعي في vitro مثبط Ribonuclease بتركيز نهائي قدره 1u/ul.

طلب