البوليمراز البولي في المستحضرات التسلسلية الجيل التالي (ngs)

البوليميراز(PAP) هو عمل إنزيمي رئيسي مسؤول عن إضافة ذيل البوليمر A إلى الطرف 3’ من جزيئات RNA. تلعب هذه النشاطات دورًا مهمًا في الاستقرار العام والنقل والترجمة لـ RNA. ومع ذلك، ضمن إطار NGS، يسمح PAP بإضافة أوليغو A إلى عينات RNA قبل التسلسل بحيث يمكن الحصول على بيانات عالية الجودة من مصادر RNA متنوعة.

أهمية إضافة ذيل البوليمر A

هناك العديد من المزايا المرتبطة بإدماج ذيل البوليمر A في mRNA. أولاً وقبل كل شيء، يساعد ذيل A في تعزيز استقرار جزيئات RNA ضد نشاط الريبونوكلياز بواسطة الإكسونوكلياز. ثانيًا، يلعب ذيل البوليمر A دورًا في بدء الترجمة من خلال تعزيز ارتباط الريبوسوم بـ mRNA. في حالة تحضيرات NGS، يمكن استخدام mRNA ذو ذيل البوليمر A بسهولة لتحليل تعبير الجينات بشكل أكثر تركيزًا جنبًا إلى جنب مع تباينات النسخ حيث يمكن إثراؤها بشكل محدد.

تحضير عينات NGS

تشمل سير العمل في NGS إعداد عينات RNA التي تتضمن الخطوات التالية: النسخ العكسي، بناء CDNA، والتضخيم. من الشائع أيضًا إضافة بولي A بوليميراز أثناء تخليق CDNA من أجل تضمين ذيل بولي-A في جزيئات cDNA النهائية. هذه التعديلات حاسمة لتضخيم المكتبة وتسلسلها لأنها تزيد من كفاءة الخطوات المعنية في إعداد المكتبات.

التطبيقات في RNA-Seq

PAP مفيد جدًا أيضًا في تطبيقات تسلسل RNA (RNA-Seq) لأنه يسمح بزيادة كفاءة إثراء mRNA ذو ذيل بولي A. يساعد ذلك في التقاط صورة أوضح لمستوى النسخ في الكائن الحي المدروس. وبالتالي، يمكن أن تساعد هذه التعزيزات في تحديد الجينات المعبر عنها بشكل مختلف، أو أحداث الانقسام البديل، أو حتى RNAs غير المشفرة. علاوة على ذلك، فإن تضمين PAP في تحضيرات NGS يمكّن من الحصول على بيانات أكثر وعدًا.

إضافة PAP في تحضيرات NGS يمكن أن تحسن بشكل كبير من جودة ودقة بيانات التسلسل. وما هو أكثر أهمية، مع استمرار تقدم البحث، ستظل أهمية PAP في السماح للعلماء بالتحقيق في النسخ الجيني كبيرة.