poly a-polimerases in volgende generasie volgorde- (ngs) preparate

poli-a-polimeras(PAP) is 'n sleutel ensiematiese aksie wat verantwoordelik is vir die toevoeging van die poly-A stert aan die 3’ einde van RNA molekules. Hierdie aktiwiteit het 'n beduidende rol in die algehele stabiliteit, vervoer, en vertaling van RNA. Binne die raamwerk van NGS, egter, laat PAP die toevoeging van die A oligo aan die RNA monsters toe voor sequensiering sodat data van hoë kwaliteit uit verskeie RNA bronne verkry kan word.

Die Belangrikheid van die Toevoeging van Poly A Tailing

Daar is baie voordele verbonde aan die inkorporasie van poly A stert aan mRNA. Eerstens, help 'n stert in die verbetering van die stabiliteit van RNA molekules teen ribonuklease aktiwiteit deur eksonuklease. Tweedens, het die poly A stert 'n rol om te speel in vertaling inisiëring deur die bevordering van ribosoom hegting aan die mRNA. In die geval van NGS voorbereidings, kan poly A-stert mRNA maklik gebruik word vir meer gefokusde gene ekspressie analise saam met transkripsie variasies aangesien dit spesifiek verryk kan word.

 NGS Monster Voorbereiding

Die NGS werkvloei insluit die voorbereiding van die RNA monsters wat die volgende stappe behels: omgekeerde transkripsie, CDNA konstruksie, en amplifikasie. Dit is ook algemeen om Poly A polimerase tydens CDNA sintese by te voeg om 'n poly-A stert in die finale cDNA molekules in te sluit. Hierdie wysiging is krities vir biblioteek amplifikasie en sequensiering aangesien dit die doeltreffendheid van die stappe wat betrokke is by die voorbereiding van die biblioteke verhoog.

Toepassings in RNA-Seq

PAP is ook baie nuttig in RNA sequensiering (RNA-Seq) toepassings omdat dit 'n meer doeltreffende verryking van poly A-stert mRNA moontlik maak. Dit help om 'n duideliker transkripsie-vlak prentjie van die organisme onder studie te vang. Dus kan sulke verbetering help om differentieel uitgedrukte gene, alternatiewe splicing gebeurtenisse, of selfs nie-kodende RNA's te bepaal. Verder, om PAP in NGS voorbereidings in te sluit stel meer belowende data in staat om verkry te word.

Die toevoeging van PAP in NGS voorbereidings kan die kwaliteit en akkuraatheid van die sequensiedata aansienlik verbeter. Wat nog belangriker is, namate navorsing voortgaan om vordering te maak, sal die belangrikheid van PAP om wetenskaplikes in staat te stel om die transkriptome te ondersoek, groot bly.